[发明专利]全内反射检测基因芯片杂交结果的方法

说明书

本发明公开了一种全内反射检测基因芯片杂交结果的方法，包括：构造基因芯片检测仪，利用石英玻璃板（2）将基因芯片检测仪的暗箱（1）分为光源暗箱（3）与成像暗箱（16）；在石英玻璃板（2）上添加与石英玻璃的折射率相同的等折射率溶液（9）；将基因芯片的石英玻璃基片放置在等折射率溶液（9）上；调整面平行光光源发生器（6）的位置和角度，使得发出的面平行光形成全内反射；全内反射的隐失波（11）激发基因芯片的探针（12）上的荧光物质发出标记荧光（13）；标记荧光（13）被高分辨率相机（15）捕获，最终获得检测结果。本发明的方法避免了荧光成像过程中的背景干扰，提高了基因芯片杂交结果的信噪比和检测灵敏度。

技术领域

本发明涉及核酸分析技术领域，其是一种核酸的测定方法，并采用了一种用于核酸分析的产品，本发明尤其涉及一种全内反射检测基因芯片杂交结果的方法。本发明还特别涉及一种体外诊断检测仪器，属于体外诊断检测仪器中的高通量检测分析仪器，同时涉及分子诊断检测仪器中的分子生物信息分析处理系统。

背景技术

生物芯片技术已经广泛应用于临床疾病诊断、健康管理、药物研究开发、动植物检疫、食品检测、环境监测、科学研究、法医学检测等众多领域，有广阔的应用前景，市场需求量非常大。

基因芯片是生物芯片中的一类，是通过在芯片的基片上定植一系列的序列已知探针而制备，可用于特定标记核酸的杂交检测，能通过识别检测与信息处理来报告检测对象中核酸信息。

当前基因芯片杂交结果的检测方法主要有两大类，一个是利用激光共聚焦扫描仪逐一扫描确定每个探针位置的杂交状态，另一个是利用CCD（电荷耦合器件，chargecoupled device）相机或CMOS（互补金属氧化物半导体，Complementary Metal-Oxide-Semiconductor）相机一次性成像然后对图像进行解析并获取基因芯片杂交结果。无论哪种荧光成像，都是使用带通滤光片将激发光折射到探针上的标记荧光物质并激发荧光物质发出标记荧光，标记荧光再通过带通滤光片进入检测器完成荧光成像，由于激发光与标记荧光同时存在于探针上，必然会有激发光对荧光成像结果的背景干扰。在荧光成像时，过高的背景干扰会形成假阴性或假阳性；假阴性会造成疾病的延误治疗，还会造成无法挽回的生命损失。有效降低基因芯片检测时的背景干扰，提高基因芯片的检测结果准确率，对基于基因芯片的疾病筛查意义重大。

发明内容

本公开的目的在于至少部分地克服现有技术的缺陷，提供一种新的全内反射检测基因芯片杂交结果的方法。

本公开的目的还在于提供一种全内反射检测基因芯片杂交结果的方法，克服激发光对荧光成像结果的背景干扰造成假阴性或假阳性的问题。

为达到上述目的或目的之一，本公开提供了如下技术方案：

一种全内反射检测基因芯片杂交结果的方法，所述方法包括：构造基因芯片检测仪，所述基因芯片检测仪中设置有石英玻璃板，所述石英玻璃板将基因芯片检测仪的暗箱分为光源暗箱与成像暗箱；在石英玻璃板上添加与石英玻璃的折射率相同的等折射率溶液；将基因芯片的石英玻璃基片放置在等折射率溶液上，等折射率溶液将基因芯片的石英玻璃基片和石英玻璃板粘合在一起，使得基因芯片的石英玻璃基片、等折射率溶液和石英玻璃板成为折射率连续一致的光学介质；调整面平行光光源发生器的位置和角度，使得发出的面平行光能够照射到基因芯片的石英玻璃基片上形成全内反射，光源激发光被全反射形成光源反射光的同时还会在基因芯片的石英玻璃基片的表面形成全内反射的隐失波；全内反射的隐失波激发基因芯片的石英玻璃基片上的探针上已经完成杂交和荧光标记的荧光物质而发出标记荧光；标记荧光被高分辨率相机捕获，形成荧光成像图，经过数据分析和整理，最终获得基因芯片杂交的检测结果。

根据本发明的一个优选实施例，所述面平行光在石英玻璃基片的表面100nm范围内形成全内反射的隐失波。

根据本发明的一个优选实施例，所述面平行光照射到石英玻璃基片上的光源激发光能够覆盖石英玻璃基片。