[发明专利]一种双向迷你启动子及其使用方法

说明书

本发明属于转基因和基因治疗技术领域，具体涉及一种双向迷你启动子及其使用方法，其所述启动子为双向启动，所述启动子正向下方酶切连接Cas9、GFP或TETR蛋白表达框进行转录表达，反向下方酶切连接sgRNA或shRNA蛋白表达框进行转录表达，通过缩减常规启动子序列，通过融合手段制作了一个双向迷你启动子，可以启动两短序列的分别转录，而且该双向启动子序列体积小，可以应用启动Cas9和sgRNA的表达，缩小质粒的长度，便于质粒经过AAV或者纳米材料的包装。

技术领域

本发明属于转基因和基因治疗技术领域，具体涉及一种双向迷你启动子及其使用方法。

背景技术

在现有的基因治疗领域，Cas9技术广泛应用，但是常用的spCas9质粒表达框大于4.2kb，携带的启动子和polyA元件组合已经超过4.7kb，造成的问题之一就是：1.很难在一个AAV病毒内包装spCAS9；其二，现在还没有一个能用于AAV包装的同时表达spCas9和sgRNA的质粒。

发明内容

本发明的目的是要提供一种质粒长度短、可双向转录的双向迷你启动子及其使用方法。

为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案如下：

一种双向迷你启动子，其所述启动子为双向启动，所述启动子正向下方酶切连接Cas9、GFP或TETR蛋白表达框进行转录表达，反向下方酶切连接sgRNA或shRNA蛋白表达框进行转录表达。

上述的一种双向迷你启动子，其所述启动子序列小于200bp。

上述的一种双向迷你启动子，其所述启动子用于缺陷型rAAV腺病毒的包装。

一种双向迷你启动子的使用方法，其包括：

(1)将Cas9、GFP或TETR蛋白表达框通过酶切连接到双向迷你启动子正向下方，SgRNA或shRNA蛋白表达框酶切连接到双向迷你启动子反向下方；

(2)将构建完成的质粒转染T293细胞，通过WB或Q-PCR鉴定双向迷你启动子的启动效率；

(3)通过复制缺陷型rAAV腺病毒包装将质粒进入蛋白质外壳，单一病毒感染目的细胞即可达到两种元件的表达。

有益效果：

本发明通过缩减常规启动子序列，通过融合手段制作了一个双向迷你启动子DMP，DMP启动子可以启动两短序列的分别转录，而且该双向启动子序列体积小，可以应用启动Cas9和sgRNA的表达，缩小质粒的长度，便于质粒经过AAV或者纳米材料的包装；

本发明点在于通过缩减常规启动子序列，通过融合手段制作了一种双向而且短的启动子组合质粒，其优点在于①启动子为双向启动，所述启动子正向下方酶切连接Cas9、GFP或TETR蛋白表达框进行转录表达，反向下方酶切连接sgRNA或shRNA蛋白表达框进行转录表达。②启动子构架比较短，有利于缩小质粒的长度。便于纳米载体和病毒的包装

附图说明

图1为本发明元件示意图。

图2为本发明构建和使用模式示意图。

具体实施方式

下面对发明内容作详细的解释。

实施例

如图1和图2，本发明为双向启动子，所述启动子正向下方酶切连接Cas9、GFP或TETR蛋白表达框进行转录表达，反向下方酶切连接sgRNA或shRNA蛋白表达框进行转录表达，启动子序列小于200bp，用于缺陷型rAAV腺病毒的包装。

其使用方法如下