[发明专利]一种SARS-CoV-2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于新型冠状病毒检测的可视化逆转录环介导等温扩增试剂盒及其使用方法。所述试剂盒，由新型冠状病毒核衣壳(N)基因环介导等温扩增引物组构成，试剂盒成分主要由新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组溶液、环介导等温扩增反应混合液、钙黄绿素‑Mn²⁺染料混合液、Bst 3.0DNA聚合酶、新冠病毒N基因阳性质控品构成，可采用可视化逆转录环介导等温扩增的检测方法，进行新冠病毒的快速检测。本方法在70分钟之内可以完成检测，特异性强，灵敏度高，为新型冠状病毒的防控及流行趋势调查分析提供了一种简便、快速的途径。

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种SARS-CoV-2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法。

背景技术

新冠病毒，又称为新型冠状病毒，国际病毒分类委员会已将其命名为“SARS-CoV-2”。新型冠状病毒肺炎临床表现以发热、乏力、干咳为主要表现，鼻塞、流涕等上呼吸道症状少见。约半数患者多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒征休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。

按照最新指南规定，利用荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性仍然是确诊的金标准。但需要较昂贵的仪器和专业的技术人员，检测时间长，试验成本也偏高。

环介导等温扩增(LAMP)检测技术的特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在Bst DNA聚合酶的作用下，恒温条件下进行核酸扩增，具有操作简单、特异性强特点。另外通过环引物的添加，大大加快了反应的速度。LAMP检测技术最大的优势在于不依赖于昂贵的专业检测设备，该方法简便易操作，实验流程简单快速，不具备专业技能的一般人员就能在疾病现场进行快速诊断。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种SARS-CoV-2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法。该试剂盒定性准确、重复性好、灵敏度高、快速、简单，具有较低的应用成本。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种SARS-CoV-2的可视化LAMP同步检测试剂盒，包括：SARS-CoV-2-N-F3引物、SARS-CoV-2-N-B3引物、SARS-CoV-2-N-FIP引物、SARS-CoV-2-N-BIP引物、1×Lamp PCR Master Mix、Bst 3.0DNA聚合酶、钙黄绿素-Mn²⁺染料和ddH₂O；

所述检测新冠病毒SARS-CoV-2的N基因的RT-LAMP引物组包括2条外引物SARS-CoV-2-N-F3/SARS-CoV-2-N-B3和2条内引物SARS-CoV-2-N-FIP/SARS-CoV-2-N-BIP；所述SARS-CoV-2-N-F3的核苷酸序列为SEQ ID No.1，SARS-CoV-2-N-B3的核苷酸序列为SEQ IDNo.2，SARS-CoV-2-N-FIP的核苷酸序列为SEQ ID No.3，SARS-CoV-2-N-BIP的核苷酸序列为SEQ ID No.4。

优选的，在检测新冠病毒SARS-CoV-2的N基因的RT-LAMP引物组中，SARS-CoV-2-N-F3、SARS-CoV-2-N-B3、SARS-CoV-2-N-FIP、SARS-CoV-2-N-BIP的摩尔比为1:1:4:4。

优选的，还包括2×Lamp PCR Master Mix和钙黄绿素-Mn²⁺染料试剂。