[发明专利]以CD99为靶点的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了一种优化的以CD99受体为靶点的嵌合抗原受体及其用途，所述嵌合抗原受体从N端到C端顺次拼接信号肽、单链抗体ScFv、strepII、CD8hinge、CD28跨膜区、CD28胞内结构域、胞内共刺激域4‑1BB和CD3ζ链，所述单链抗体ScFv能够特异性识别肿瘤细胞表面的CD99蛋白。以CD99蛋白为靶点的嵌合抗原受体用于修饰免疫细胞从而用于表面CD99阳性肿瘤的治疗。

本发明要求中国专利申请CN202110485551.1的优先权，该优先权文件的说明书、说明书附图和权利要求书所记载的内容全文引入本发明的说明书并被作为本发明说明书原始记载的一部分。申请人进一步声明，申请人拥有基于该优先权文件修改本发明的说明书和权利要求书的权利。

技术领域

本发明涉及医药生物领域，具体是指一种以CD99为靶点治疗广谱性肿瘤的嵌合抗原受体(CAR)及其应用。

背景技术

2019年初，美国癌症学会公布的数据表明，全球2018年新发1810万例癌 症，死亡960万。全球的科学家们也在致力于各种抗癌疗法的研究，免疫治疗作 为继化疗和靶向治疗后抗癌治疗的第三次革命成为新一代的肿瘤治疗手段。2013 年美国《科学》杂志把肿瘤免疫治疗选为当年最大的科学突破，2015年又将肿 瘤免疫联合治疗列为最值得关注的四项科学进展之一。

肿瘤免疫治疗是指应用免疫学的原理和方法，提高肿瘤的免疫原性，利用自身的免疫系统攻击肿瘤细胞，从而抑制或杀伤肿瘤细胞。按其治疗策略分为两大类：免疫检查点抑制剂(如CTLA-4、PD-1、PD-L1等)和细胞免疫治疗(如 CAR-T等)。其中CAR-T细胞全称为嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor T-Cell)，原理为通过基因工程的方法，将能识别某种肿瘤抗原的抗体单链可变区(Scfv)与CD3-ζ链的胞内区在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染体外培养的患者T细胞，使其表达嵌合抗体受体(CAR)。患者的T细胞被“重编程”后，生成大量具有杀伤性的CAR-T细胞，能够特异性的靶向肿瘤细胞。CAR-T与传统的免疫疗法相比，具有治疗更精确、靶向更精准、杀瘤更广泛、效果更持久等显著优势。作为新型前沿治疗手段，CAR-T治疗主要由中美引领发展，中国的表现尤为突出，截至2019年5月，全球CAR-T治疗临床试验登记项目507项，主要分布在中国和美国，分别占试验总数的44.2％和 36.7％。CAR-T治疗的概念最早于1989年提出，至今三十年CAR-T疗法历经四代技术革新。经过多年研究，CAR-T疗法在临床上获得巨大成功，尤其是血液型肿瘤治疗取得了巨大的成就，多个产品已经批准上市。例如2017年FDA批准了两种靶向CD19 CAR-T药物用于治疗幼儿或成人复发或难治性B细胞前体急性淋巴细胞白血病(ALL)，意味着CAR-T治疗成为肿瘤新的合法的治疗策略。

尽管目前在CAR-T治疗肿瘤领域捷报不断，但是CAR-T细胞治疗肿瘤过程中仍然面临着肿瘤的高度异质性导致的脱靶以及靶点的单一性导致治疗等问题。其中肿瘤细胞的高度异质性直接导致了CAR-T疗法在治疗过程中的局限性，而靶点的单一性限制了治疗上的广谱性。因此，选择肿瘤细胞中特异性表达且在不同肿瘤中具有广谱性表达的膜表面标志物成为CAR-T治疗有效性至关重要的一步。

CD99蛋白是由基因MIC2(MIC2X，MIC2Y)所编码的定位于细胞膜上的糖基化蛋白，其分子量为32kD。主要在胸腺表皮细胞，胰岛细胞，卵巢颗粒细胞以及睾丸支持细胞等正常组织细胞中高表达。过去的研究表明，血管瘤样纤维组织细胞瘤等20种肿瘤中95％以上的样本均为CD99阳性，T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤等19种肿瘤中大于75％的病人为CD99阳性，胶质母细胞瘤等14种肿瘤中大于55％的病人显示为CD99阳性。尤其是在尤文氏肉瘤中研究发现几乎 100％的此类肿瘤为CD99阳性，临床上将其作为尤文肉瘤的诊断标志物。CD99 不仅在初症时期的肿瘤中高表达，对于T细胞急性淋巴白血病(T-ALL)而言， CD99的表达用于化疗后免疫微小残留细胞的检测与诊断T-ALL复发的依据。我们通过对原有的靶向CD99的ScFv序列优化，获得一个靶向杀伤效果更强的新的ScFv。

发明内容