[发明专利]一种制备重组粘质沙雷氏菌核酸酶的方法

权利要求书

1.一种在大肠杆菌中制备重组粘质沙雷氏菌核酸酶的方法，其特征在于：将粘质沙雷氏菌核酸酶的编码核酸与突变型SUMO3标签的编码核酸进行融合表达，分离获得粘质沙雷氏菌核酸酶；其中，所述突变型SUMO3标签，其第47位由Cys突变为Ser, 所述突变型SUMO3标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；融合表达时，所述的突变型SUMO3标签位于N端，所述粘质沙雷氏菌核酸酶位于C端，所述的粘质沙雷氏菌核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的突变型SUMO3标签的N端还包括His标签。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以大肠杆菌进行表达，诱导温度37±2℃，0.5±0.2mM IPTG，诱导表达12±4小时。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，以大肠杆菌进行表达，获得融合蛋白包涵体后，还包括：包涵体变性、复性和纯化的步骤；所述的纯化步骤中，包括：添加SUMO蛋白水解酶、切割融合蛋白、分离获得所述粘质沙雷氏菌核酸酶。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述SUMO蛋白水解酶为SUMO特异性蛋白酶2。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括分别利用清洗液、溶解液以及复性液对融合蛋白包涵体进行清洗、溶解以及复性的步骤。

7.权利要求6所述方法，其特征在于，所述清洗液包括：10-50mM三羟甲基氨基甲烷pH7.4，0.1-1M NaCl，0.1-1％Triton X-100；和/或

所述溶解液包括：6-8M尿素，5-50mM二硫苏糖醇；和/或

所述复性液包括：0.2-2M L-精氨酸，10-200mM三羟甲基氨基甲烷pH8.0，1-10mM还原型谷胱甘肽或半胱氨酸，1-10mM氧化型谷胱甘肽或胱氨酸，1-20% (v/v)甘油，10-50mM氯化镁。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述包涵体蛋白复性后，上样至亲和层析柱，柱上切除位于粘质沙雷氏菌核酸酶N端前的区段，收集含有粘质沙雷氏菌核酸酶的流穿液，纯化得到的有活性的粘质沙雷氏菌核酸酶。

9.一种用于在大肠杆菌中表达的构建体，其特征在于，其包含与所述突变型SUMO3标签操作性连接的粘质沙雷氏菌核酸酶的编码核酸；所述的突变型SUMO3标签位于N端，所述粘质沙雷氏菌核酸酶位于C端，所述的粘质沙雷氏菌核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示, 所述突变型SUMO3标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

10.如权利要求9所述的用于在大肠杆菌中表达的构建体，其特征在于，所述的突变型SUMO3标签的N端还包括His标签。

11.一种宿主细胞，其特征在于，其为大肠杆菌，其包含权利要求9所述的用于在大肠杆菌中表达的构建体。

12.权利要求9所述的构建体的应用，其特征在于，用于在大肠杆菌中制备重组粘质沙雷氏菌核酸酶，提高其包涵体蛋白复性率。

13.一种用于重组表达外源蛋白的试剂盒，其特征在于，其中包括权利要求9所述的构建体, 或权利要求11所述的宿主细胞。

14.如权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，其中还包括选自下组的试剂：

SUMO蛋白水解酶；和/或

清洗液；和/或

溶解液；和/或

复性液。

15.如权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述SUMO蛋白水解酶为SUMO特异性蛋白酶2；和/或

所述清洗液包括：10-50mM三羟甲基氨基甲烷pH7.4，0.1-1M NaCl，0.1-1%Triton X-100；和/或

所述溶解液包括：6-8M尿素，5-50mM二硫苏糖醇；和/或

所述复性液包括：0.2-2M L-精氨酸，10-200mM三羟甲基氨基甲烷pH8.0，1-10mM还原型谷胱甘肽或半胱氨酸，1-10mM氧化型谷胱甘肽或胱氨酸，1-20% (v/v)甘油，10-50mM氯化镁。