[发明专利]一种DNA自组装用序列文库、其结构元件及其应用

权利要求书

1.一种DNA自组装用序列文库，其特征在于该序列文库由区域1、区域2和区域3组成，其中区域1和区域3中序列的设计规则为：长度为7个碱基，G、C碱基数之和为3，相互之间相似率及互补率均小于等于4个碱基；区域2中序列的设计规则为：长度为16个碱基，G、C碱基数之和为8，相互之间相似率及互补率均小于等于6个碱基。

2.根据权利要求1所述的一种DNA自组装用序列文库，其特征在于所述的区域2为SEQID NO.1—174所示的碱基序列中至少一种。

3.根据权利要求1所述的一种DNA自组装用序列文库，其特征在于所述的区域1/3为SEQID NO.175—381所示的碱基序列中至少一种。

4.一种DNA自组装结构元件，由一个触发链T和一对具有茎环结构的发夹结构DNA链H1和H2组成，所述的T链、H1和H2采用根据权利要求1、2或3所述的一种DNA自组装用序列文库中的序列构建而成，其特征在于：所述的T链的结构为：如图1中的T；所述的H1和H2的结构分别为：如图1中的H1和H2，其中1，2和3分别为从区域1、区域2和区域3种任选的一段序列；1’、2’和3’分别为1、2和3的互补序列。

5.一种筛查急性心肌梗死相关的微小RNA的方法，采用杂交链式反应法，其结构元件为根据权利要求4所述的DNA自组装结构元件，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.任一套用于HCR反应的H1和H2均修饰有荧光基团，且该荧光基团修饰在H1和H2的3’端；根据被检测靶标的数目进行荧光基团的选择，对于数目大于1小于等于3个的待检测靶标，选择两个不同颜色的荧光基团，相应有3个组合；对于数目大于3小于等于6个的待检测靶标，选择三个不同颜色的荧光基团，以此类推；最终得到

b.将有生物素修饰的捕获链，即C链与有链霉亲和素修饰的磁珠在PBS缓冲液中反应，由于生物素和链霉亲和素会特异性结合，因此磁珠能捕获C链，得到结合有捕获链C链的有链霉亲和素修饰的磁珠；

c.将步骤b所得的磁珠、待测液、T链以及步骤a所得H1链和H2链在PBS缓冲液中进行杂交链式反应；

d.将步骤c所得磁珠通过流式分析各组组装产物的荧光信号。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的步骤b的具体操作步骤为：将链霉亲和素修饰的磁珠、捕获链C链加入1×PBS中，使链霉亲和素修饰的磁珠和捕获链C链的终浓度分别为：0.05mg/ml～0.1mg/ml、150nM～250nM；振荡混匀后，置于振荡型恒温金属浴中，37℃反应1h～2h；反应结束后清洗磁珠，即得到结合有捕获连C链的有链霉亲和素修饰的磁珠。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的步骤c的具体操作步骤为：将结合有捕获连C链的有链霉亲和素修饰的磁珠、待测液、T链以及荧光基团修饰在H1和H2加入到1×PBS缓冲溶液中进行杂交链式反应，使模拟靶标miRNA的终浓度为50nM～150nM、T链的终浓度为150nM～250nM、荧光基团修饰的H1和H2的终浓度为：300nM～600nM；置于振荡型恒温金属浴中，37℃反应1h～2h；反应结束后清洗磁珠。