[发明专利]用于萃取油脂中亲脂性污染物的固相逆向相转移萃取技术

权利要求书

1.一种用于萃取油脂中亲脂性污染物的固相逆向相转移萃取检测方法，其特征在于，选择预装SIPTE悬液的注射器和对应的侧向流免疫层析检测卡；将待测试的油样倒入样品杯中，用预装SIPTE悬液的注射器从样品杯吸入油样并盖上注射器自带的密封帽，充分振荡后，竖直插在试剂盒的注射器支架上静置，取出注射器，去掉密封帽，将注射器口对准侧向流免疫层析检测卡的样品孔，轻推注射器推杆，向样品孔中滴加若干滴下层水相，检测卡静置反应，最后得出检测结果；

其中：所述预装SIPTE的注射器为预装有针对目标化合物的SIPTE悬液，所述SIPTE是以胶体金为载体微球或以羧基化或氨基化的微球为载体微球，微球表面结合了针对目标化合物的特异性抗体，并通过强化的水化层来保护抗体蛋白；所述强化的水化层通过由pH7.2的20mM磷酸盐缓冲液、5%的牛血清白蛋白、0.3%的酪蛋白、0.5%的聚乙烯吡咯烷酮、0.02%的海藻酸钠组成的封闭缓冲液在微球周围构建；所述SIPTE悬液是将SIPTE均匀分散在IPTE溶液中，在SIPTE悬液中的微球含量为；所述IPTE包括以下任一种：月桂醇聚醚类化合物C₁₂H₂₅(OCH₂CH₂)nOH，分子式中的n=15、环糊精；

所述侧向流免疫层析检测卡的制备：利用划膜仪将一定浓度包被抗原以及羊抗鼠IgG均匀涂到层析膜上，经一定干燥工艺处理后生成能够与免疫微球结合的检测线和参考线；将试纸装载于塑料卡壳中，制成检测卡; 将一支检测卡和一包干燥剂装入铝箔袋中，密封保存。

2.根据权利要求1所述的固相逆向相转移萃取检测方法，其特征在于，所述试剂盒包括盒体，盒体内通过隔板设置有注射器储存区、免疫层析检测卡储存区、注射器支架和样品杯区，所述盒体包括盒底、盒侧面和盒盖，所述盒侧面包括两个长侧面和两个短侧面，所述盒盖和一个所述长侧面转动连接，所述注射器储存区紧靠另一个所述长侧面设置，所述注射器储存区相邻设置免疫层析检测卡储存区和注射器支架，所述注射器支架相邻设置样品杯区和免疫层析检测卡储存区；

所述的注射器储存区设置有若干预装SIPTE的注射器，所述免疫层析检测卡储存区设置有若干侧向流免疫层析检测卡，所述注射器支架设置有用于垂直静置注射器的若干孔洞，所述样品杯区设置有若干样品杯。

3.根据权利要求1所述的固相逆向相转移萃取检测方法，其特征在于，所述SIPTE悬液加入NaN₃或Procline300以防止长菌。

4.根据权利要求2所述的固相逆向相转移萃取检测方法，其特征在于，将所述预装SIPTE的注射器10-20支、所述侧向流免疫层析检测卡10-20袋、所述样品杯10-20个装入快速检测试剂盒中，完成试剂盒的组装，获得油脂中亲脂性污染物的快速检测试剂盒的成品。

5.根据权利要求1所述的固相逆向相转移萃取检测方法，其特征在于，以胶体金为载体微球的制备为：取平均粒径为25nm的纳米金颗粒的溶液，用0.1mol/L的碳酸钾溶液调节pH值为7.5，向溶液中加入一定浓度的单克隆抗体，反应30分钟后，加入含牛血清白蛋白、酪蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸钠的封闭缓冲液，继续反应30分钟；标记与封闭完成后，纳米金表面形成保护抗体的水化层；经4℃、12000r/min离心30分钟后，去除上清，然后用磷酸盐缓冲液洗涤、重悬后，制得以胶体金为载体的SIPTE。

6.根据权利要求1所述的固相逆向相转移萃取检测方法，其特征在于，以羧基化的微球为载体微球的制备为：

（1）微球储备液超声15 min得到悬浮液，取微球悬浮液至2mL的圆底离心管中，加EDC和Sulfo-NHS，上下吹打，室温下，颠倒混匀反应20min，4℃，12000rpm离心30min，移除液相；

（2）离心后的沉淀加MES缓冲液，上下吹打，超声3min，在4℃，12000 rpm，离心30 min，移除液相；重复一次，共两次洗涤；

（3）向离心后的沉淀加单克隆抗体溶液，上下吹打混匀；室温下，颠倒混匀反应20 min，在4℃，12000 rpm离心30 min，移除液相；

（4）离心后的沉淀加PB缓冲液，上下吹打，超声3min，在4℃，12000rpm，离心30min，移除液相；重复一次，共两次洗涤；

（5）离心后沉淀加含牛血清白蛋白、酪蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸钠的封闭液，静置30min，4℃，12000 rpm，离心30 min，移除液相；

（6）用 PB缓冲液洗涤两次后，复溶，制得以羧基化微球为载体的SIPTE。