[发明专利]可提高ACE抑制活性的牡蛎活性肽的制备方法

说明书

本发明公开一种可提高ACE抑制活性的牡蛎活性肽的制备方法，首先采用中性蛋白酶对牡蛎匀浆进行酶解，获得分子量小于3kDa的牡蛎小分子肽，再以牡蛎小分子肽为反应底物，加入定量的脯氨酸及木瓜蛋白酶，在温度60℃下进行Plastein反应2 h，经过灭酶、干燥等处理，获得ACE抑制活性达到80%以上的牡蛎活性肽，具有显著降血压的作用且对人体无副作用。

技术领域

本发明涉及一种牡蛎活性肽的制备方法，尤其是一种可提高ACE抑制活性的牡蛎活性肽的制备方法。

背景技术

牡蛎营养丰富，含有包括具有ACE（血管紧张素转换酶）抑制活性等多种活性成分。目前，对牡蛎多采用酶解的方法以得到牡蛎活性肽，但所得到的活性肽是通过酶将蛋白质的肽键在不同地方断裂而得到的源自蛋白质一级结构的多肽序列，本质上是原料蛋白质的氨基酸序列的部分肽片段，其活性受到制约。

Plastein反应又称为合成类蛋白反应或塑蛋白反应，是在反应底物（蛋白水解物）中加入氨基酸或/和蛋白酶，通过蛋白酶催化高浓度的蛋白水解物生成沉淀、触变胶体或者具有触变性粘稠胶状物的过程。 Plastein反应可以使肽通过缩合作用、转肽作用等而改变肽的一级结构，得到不同于原料蛋白质的氨基酸序列的多肽，即Plastein反应可以用来修饰生物活性肽，改变多肽的氨基酸序列从而使其生物活性发生改变。然而，在不同的反应底物中加入不同的氨基酸及蛋白酶，以及反应温度、时间等条件不同，所得产物的活性相差很大。迄今为止，并没有关于通过外源添加氨基酸和蛋白酶的Plastein反应，制备提高ACE抑制活性的牡蛎活性肽的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种可提高ACE抑制活性的牡蛎活性肽的制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种可提高ACE抑制活性的牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

a. 将牡蛎去壳取肉后用水浸泡至电导率降至小于180PPM，匀浆、煮沸，冷却后得到牡蛎匀浆液；

b. 向牡蛎匀浆液中加入中性蛋白酶，加酶量为牡蛎匀浆液质量的2%，在pH7.0、温度50℃条件下酶解3小时，得到酶解液；

c. 将酶解液用分子量3kDa的超滤膜进行超滤，保留透过液，获得小分子肽液体；

d. 将小分子肽液体进行Plastein反应，所述Plastein反应的条件为：反应底物为质量浓度为45%的小分子肽液体，添加与反应底物质量比为0.5mmol/g的脯氨酸，加入为反应底物质量3%的木瓜蛋白酶，反应温度60℃,反应时间2 h后升温至100℃并保持10分钟；

e. 浓缩、干燥得粉末。

本发明首先采用中性蛋白酶对牡蛎匀浆进行酶解，获得分子量小于3kDa的牡蛎小分子肽，再以牡蛎小分子肽为反应底物，加入定量的脯氨酸及木瓜蛋白酶，在温度60℃下进行Plastein反应2 h，经过灭酶、干燥等处理，获得ACE抑制活性达到80%以上的牡蛎活性肽，具有显著降血压的作用且对人体无副作用。

附图说明

图1是本发明实施例与添加其它氨基酸对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响示意图。

图2是本发明实施例与不同浓度反应底物对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响示意图。

图3是本发明实施例与不同加酶量对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响示意图。

图4是本发明实施例与不同反应温度对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响示意图。

图5是本发明实施例与不同反应时间对游离氨基酸减少量及ACE抑制率的影响示意图。

图6是本发明实施例与牡蛎粉、牡蛎肽模拟体外消化时间对ACE抑制率的影响示意图。

具体实施方式