[发明专利]一种血清二氧化碳测定试剂球的制备方法及试剂球

说明书

本发明实施例涉及医学免疫体外诊断技术领域，尤其涉及一种血清二氧化碳测定试剂球的制备方法及试剂球，该方法将混合液以液滴的形式滴在液氮中，使液滴形成冰球，再将冰球进行冷冻干燥制得血清二氧化碳测定试剂球，其中，混合液包括以下组分：缓冲液5‑150mmol/L，磷酸烯醇式丙酮酸5‑20g/L，还原型辅酶Ⅰ：0.1‑10g/L，苹果酸脱氢酶5‑20KU/L，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1‑5KU/L，稳定剂0.1‑10g/L，赋形剂10‑100g/L。该剂量范围的赋形剂能够保证试剂球的形态及复融溶解性，保护反应物活性，并有益于试剂球完全冻干。也即，通过该方法制备出的血清二氧化碳测定试剂球，具有较好的形态及复融溶解性，能完全冻干，从而，具有较高的稳定性和精密度，并能实现及时诊断。

技术领域

本发明实施例涉及医学免疫体外诊断技术领域，尤其涉及一种血清二氧化碳测定试剂球的制备方法及试剂球。

背景技术

血清或血浆中90％～95％的CO₂以HCO₃^-的形式存在，是机体维持酸碱平衡的主要缓冲碱，也是判断酸碱代谢情况的常用指标之一。血液中CO₂含量测定对酸碱平衡紊乱性疾病的进程和疗效判断提供了重要的依据，在临床上应用十分普遍，是不可缺少的急诊项目之一。

目前，临床上用于测定血清二氧化碳的酶法，一方面，试剂液需要额外添加还原性辅酶I(NADH)的循环再生系统，并且，稳定性较差。另一方面，其干粉试剂复溶后稳定性较差，液体试剂有效期较短，且依赖大型全自动生化分析仪，难以应用在病人身边即时诊断(point-of-care，POCT)，使用上受到一定限制。虽然，现有用于检测其它项目的冻干试剂球，但是，现有的冻干试剂球形态较差，难以完全冻干，导致其具有较低的稳定性和准确性。

发明内容

本发明实施例主要解决的技术问题是提供一种血清二氧化碳测定试剂球的制备方法、试剂球及微流控芯片，采用该方法制备得到的试剂球，能使试剂球保持活性，稳定性好，并具有较好的形态及复融溶解性，具有较高精密度。

为解决上述技术问题，第一方面，本发明实施例中提供给了一种血清二氧化碳测定试剂球的制备方法，包括：

将缓冲液、磷酸烯醇式丙酮酸、还原型辅酶Ⅰ、苹果酸脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、镁盐、稳定剂、赋形剂和水混合形成混合液，并调整所述混合液的PH值至预设值；

将所述混合液的液滴滴在液氮中，以使所述液滴形成冰球；

将所述冰球进行冷冻干燥制得所述血清二氧化碳测定试剂球；

其中，所述混合液包括以下组分：缓冲液5-150mmol/L，磷酸烯醇式丙酮酸5-20g/L，还原型辅酶Ⅰ：0.1-10g/L，苹果酸脱氢酶5-20KU/L，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1-5KU/L，稳定剂0.1-10g/L，赋形剂10-100g/L。

在一些实施例中，所述将缓冲液、磷酸烯醇式丙酮酸、还原型辅酶Ⅰ、苹果酸脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、镁盐、稳定剂、赋形剂和水混合形成混合液，并调整所述混合液的PH值至预设值，包括：

将所述缓冲液加入第一预设定量的水中；

待所述缓冲液在所述水中完全溶解后，依次加入稳定剂、赋形剂和镁盐，得到第一溶液，并调节所述第一溶液的PH值至所述预设值，其中，所述预设值的范围为7.5-9.0；

将所述磷酸烯醇式丙酮酸、所述还原型辅酶Ⅰ、所述苹果酸脱氢酶和所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶依次加入所述第一溶液中，并将第二预设定量的水加入所述第一溶液中，得到第三预设定量的所述混合液。

在一些实施例中，所述赋形剂包括海藻糖、甘露醇、肌醇、水溶性淀粉、葡聚糖1万、葡聚糖4万中的至少一种。