[发明专利]DNase I突变体、其编码核苷酸序列及其应用有效
| 申请号： | 202110452014.7 | 申请日： | 2021-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN113215132B | 公开（公告）日： | 2023-09-22 |
| 发明（设计）人： | 秦雪梅;柴常升;曹振;宋东亮 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/55;C40B50/06 |
| 代理公司： | 苏州根号专利代理事务所(普通合伙) 32276 | 代理人： | 朱华庆 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | dnase 突变体 编码 核苷酸 序列 及其 应用 | ||
1.一种DNase I突变体，其特征在于：该突变体是在野生型DNase I酶的基础上，进行A249T和R42H的双位点突变，或者进行A249T和F110V的双位点突变，或者进行A249T、R42H和F110V的三位点突变后所得，其中所述野生型DNase I酶的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
2.根据权利要求1所述的DNase I突变体，其特征在于：所述突变体的氨基酸序列如SEQID No.1所示。
3.编码权利要求2所述的DNase I突变体的DNA，其特征在于：所述DNA的序列如SEQ IDNo.2所示。
4.权利要求1或2所述的DNase I突变体在高通量测序文库构建中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于其步骤包括：
（1）基因组打断：在样本中加入权利要求1或2所述的DNase I突变体，进行基因组打断；
（2）打断产物纯化：打断产物用磁珠纯化；
（3）末端修复加A：片段化产物使用试剂盒进行末端修复加A；
（4）接头连接：上一步产物用试剂盒的连接模块进行接头连接；
（5）接头连接产物纯化：接头连接产物采用磁珠纯化；
（6）文库扩增和分析。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：步骤（1）中打断反应过程为：在样本中加入10×Fragment buffer 5μL，DNase I突变体0.6-1.6μL，补水至50 μL，将其置于PCR仪中进行打断，酶切温度30℃，失活温度80℃。
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