[发明专利]一种利用UHPLC-QE-MS指纹图谱鉴定咖啡生豆的方法

权利要求书

1.一种利用UHPLC-QE-MS指纹图谱鉴定咖啡生豆的方法，其特征在于：该方法具体包括如下步骤：

（1）待测样品制备：咖啡生豆样品经液氮研磨后，称取20mg加入1000μL提取液中混匀，提取液为甲醇、乙腈和水按体积比2：2：1制得，含同位素标记内标混合物：辛酸和谷氨酸；35Hz研磨处理4min，冰水浴超声5min，重复步骤3次；样品-40℃静置1h，4℃ 12000rpm离心15min，得到上清液，

（2）UHPLC-QE-MS样品检测及质控：使用超高效液相色谱仪，通过Waters-ACQUITY UPLCHSS T3液相色谱柱对步骤（1）得到的上清液进行色谱检测和代谢物鉴定，采集质谱数据；超高效液相色谱检测中流动相为：液相色谱A相为水相，含5mmol/L乙酸铵和5mmol/L乙酸，B相为甲醇；流动相的梯度洗脱程序为：0~1.2min, 1%B; 1.2-9.5min, 1%~99%B; 9.5-11.8min, 99%B; 11.8-12.0min, 99%~1%B; 12-15min, 1%B，进样体积2μL；采用ThermoQExactiveHFX质谱仪进行一级、二级质谱数据采集；详细参数如下：鞘气流速：30Arb，辅助气流速：10 Arb，毛细管柱温度：350℃，全质谱分辩率：60000，二级质谱分辩率：7500，在碰撞能量归一化模式下碰撞能量分别为：10/30/60，喷淋电压：4kV或-3.8kV；

（3）对质谱数据进行数据处理，建立并获得指纹图谱及指纹图谱相关性分析，进行咖啡生豆的品质、真伪、产地或品种的鉴定，并通过3-羟基香豆素评判咖啡生豆质量均一性。

2.根据权利要求1所述的一种利用UHPLC-QE-MS指纹图谱鉴定咖啡生豆的方法，其特征在于：步骤（3）中，数据处理的具体方法：采用ProteoWizard软件及自主编写的内核为XCMS的R程序包进行处理，处理包括：峰识别、峰提取、峰对齐和积分处理，然后与BiotreeDB自建二级质谱数据库匹配进行物质注释，算法打分的Cutoff值设为0.3。

3.根据权利要求1所述的一种利用UHPLC-QE-MS指纹图谱鉴定咖啡生豆的方法，其特征在于：步骤（3）中，指纹图谱建立的具体方法：采用“夹角余弦法”及自编R语言程序、Python分析。

4.根据权利要求1所述的一种利用UHPLC-QE-MS指纹图谱鉴定咖啡生豆的方法，其特征在于：步骤（3）中，指纹图谱相关性及评估方法：与同位素内标混合物参比识别出UHPLC-QE-MS测得的TIC图中的色谱峰化合物并进行相关性分析，相关系数大于0.9的化合物可以作为判别咖啡生豆的特征标记及质量判别标记。