[发明专利]细胞染色的质控品制备方法

说明书

本发明公开细胞染色的质控品制备方法，本制备方法中E‑Cadherin免疫磁珠和CEA免疫磁珠特异性结合肺癌循环肿瘤细胞，CD45免疫磁珠特异性结合白细胞；通过对富集的肺癌循环肿瘤细胞和白细胞染色，可以质控肺癌循环肿瘤细胞的染色试剂盒。本发明细胞染色的质控品制备方法通过抗原与抗体的特异性结合，质控结果的可信度高。

技术领域

本发明涉及细胞染色检测领域，特别涉及细胞染色的质控品制备方法。

背景技术

癌细胞从原发部位脱落，进入人体外周血，被称为循环肿瘤细胞(CirculatingTumor Cell，CTC)。肺癌主要起源于支气管的黏膜上皮，目前已经成为全球发病率最高、死亡人数最多的癌症。在肺癌患者中，肺癌循环肿瘤细胞通过血液传播转移到身体的其他器官，是导致患者死亡的主要原因。因此，检测外周血中的肺癌循环肿瘤细胞的含量的变化，对实时监测患者体内肺癌细胞的动态、评估治疗效果等具有积极的意义。

但是，现有的肺癌循环肿瘤细胞染色试剂盒对外周血中肺癌循环肿瘤细胞的检测准确性不高，容易出现假阳性/假阴性和非特异性等结果，使得医生无法做出准确的判断，给后续的分析、诊断等带来极大的影响。虽然中国专利CN107153021B公开一种循环肿瘤细胞染色的质控品制备方法，但是此方法富集肺癌循环肿瘤细胞的效果不好。

上述内容仅用于辅助理解发明的技术方案，并不代表承认上述内容是现有技术。

发明内容

本发明的主要目的是提出细胞染色的质控品制备方法，旨在解决现有染色试剂盒检测肺癌循环肿瘤细胞准确性不高的技术问题。

为实现上述目的，本发明提出一种细胞染色的质控品制备方法，包括以下步骤：

(1)将E-Cadherin免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得E-Cadherin免疫磁珠工作液，将CEA免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得CEA免疫磁珠工作液，将CD45免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得CD45免疫磁珠工作液；

(2)将所述E-Cadherin免疫磁珠工作液、所述CEA免疫磁珠工作液、所述CD45免疫磁珠工作液、白细胞和肺癌循环肿瘤细胞进行混合，得到第一混合液；

(3)去除所述第一混合液中的液体，加入固定液固定，得到肺癌循环肿瘤细胞的质控品。

可选地，所述E-Cadherin免疫磁珠与所述CEA免疫磁珠的数量比为大于或等于3：4，且小于或等于4：3；所述E-Cadherin免疫磁珠、所述CEA免疫磁珠的数量和与所述CD45免疫磁珠的数量的比为大于或等于4：3，且小于或等于5：2；所述白细胞与所述肺癌循环肿瘤细胞的数量比为大于或等于1：10，且小于或等于10：1。

第二方面，本发明提出另外一种细胞染色的质控品制备方法，包括以下步骤：

(1)将E-Cadherin免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得E-Cadherin免疫磁珠工作液，将CEA免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得CEA免疫磁珠工作液，将CD45免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得CD45免疫磁珠工作液；

(2)将所述E-Cadherin免疫磁珠工作液、所述CEA免疫磁珠工作液与肺癌循环肿瘤细胞进行混合，得到第二混合液，将所述CD45免疫磁珠工作液与白细胞混合，得到第三混合液；

(3)分别去除所述第二混合液和所述第三混合液中的液体，并加入固定液固定，得到肺癌循环肿瘤细胞的质控品。

可选地，所述E-Cadherin免疫磁珠与所述CEA免疫磁珠的数量比为大于或等于3：4，且小于或等于4：3。