[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9技术的Ahnak2基因敲除动物模型的构建方法

权利要求书

1.一种基于CRISPR/Cas9技术的Ahnak2基因敲除动物模型的构建方法，包括以下步骤：

S1：靶向小鼠Ahnak2基因的sgRNA载体构建

以Ahnak2内含子位置作为敲除区域，根据靶基因Ahnak2设计一对相应的sgRNA序列，sgRNA序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

S2：sgRNA的体外转录

将步骤S1中合成的一对sgRNA和cas9 mRNA进行体外转录；

S3：F0代小鼠获取及鉴定

将步骤S2中获得的mRNA与cas9质粒一并通过显微注射的方式注入目标受精卵中，培育获得F0代小鼠；

将获得的F0代小鼠进行剪尾、genetyping鉴定，挑选Ahnak2基因敲出的阳性F0代小鼠；

S4：F1代杂合小鼠获取及鉴定

将S3中鉴定为阳性的F0代雄性小鼠与野生型雌性小鼠于性成熟后配繁，将出生的F1代小鼠进行剪尾、genetyping鉴定，挑选Ahnak2基因敲出的阳性F1代杂合小鼠；

S5：纯合后代的获取

将S4中阳性F1代杂合雌性小鼠、阳性F1代杂合雄性小鼠杂交，获得纯合后代，构建得到Ahnak2基因敲除动物模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述sgRNA载体以PUC57-sgRNA载体为出发载体，含有针对Ahnak2基因的sgRNA。

3.一种由权利要求1或2所述方法构建得到的Ahnak2基因敲除动物模型。

4.一种利用CRISPR/Cas9技术进行Ahnak2基因敲除的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括sgRNA载体和用于检测Ahnak2基因的检测试剂；所述sgRNA载体以PUC57-sgRNA载体为出发载体，含有针对Ahnak2基因的sgRNA。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于表达Cas9mRNA的Cas9表达质粒。

6.权利要求3所述Ahnak2基因敲除动物模型在制备治疗心脏病或癌症药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述癌症包括结直肠癌和子宫癌。