[发明专利]一种制备全脑组织石蜡切片的方法与应用

说明书

本发明涉及动物组织包埋技术领域，具体公开了一种制备全脑组织石蜡切片的方法与应用。本发明的制备全脑组织石蜡切片的方法，在固定步骤所采用的固定液为含3.8‑4.2％的甲醛和0.9‑1.1％的戊二醛的固定液。本发明方法无论是组织的完整性、细胞的基本形态、HE染色后的效果等均十分理想。通过本发明获得的脑组织石蜡切片为下一步对脑组织进行HE染色、免疫荧光等实验提供了高质量的保证，也为研究胚胎时期脑的发育以及有关神经疾病的临床诊断提供了符合要求的切片，具有重要的科学意义。

技术领域

本发明涉及动物组织包埋技术领域，具体地说，涉及一种制备全脑组织石蜡切片的方法与应用。

背景技术

脑作为最重要的组织器官之一，一直以来是生物医学研究的重点与难点。许多疾病与脑组织的病变有关，例如一些神经退行性疾病脑损伤(BI)、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)等，目前的医学技术对一些脑部疾病仍然束手无策。病理切片是观察病理变化，作出病理诊断，为临床诊断和治疗提供帮助的有效手段。如何获得高质量的病理切片就变得至关重要。

影响切片制作质量的因素很多，包括取材、固定液的选择、切片的存储等。固定是切片制作的关键步骤之一，固定液的选择极其重要，只有在固定过程中对样品进行良好的处理才能保证获得高质量的切片。

目前在脑组织的固定中常常使用4％甲醛作为固定液。但在胚胎发育的不同时期，由于脑的组织形态变化快速，仅以该固定液对胚胎所有时期的脑组织进行固定，效果并不理想。而在其他组织切片制作过程中固定液的使用主要还有Carnoy固定液、添加一定量戊二醛固的4％甲醛固定液等。但由于动物组织固定时，不同组织的生理学特性差异巨大，尤其是脑组织结构主要是神经细胞和神经胶质细胞，具有含水较丰富、质地较软、结构疏松、韧性低、极易自溶等独有的特点，因此也无法直接借鉴现有固定其他组织的方案。

鉴于切片在研究脑病理变化中的重要作用，如果能够找到一种适合各个时期胚胎脑组织的固定液和切片制作方法将有很大的实际意义，对于更好的研究脑部发育或者相关病理情况大有裨益。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种能够适合胚胎发育不同时期的脑组织的固定液及切片制作方法，以解决因胚胎脑组织固定不理想等问题所导致的切片质量不佳的问题。

为了实现本发明的发明目的，本发明的技术方案如下：

一种制备全脑组织石蜡切片的方法，在固定步骤所采用的固定液为含3.8-4.2％的甲醛和0.9-1.1％的戊二醛的固定液。

优选，所述固定液为含4％的甲醛和1％的戊二醛的固定液。

本发明根据全脑组织的生理学和结构特性，尤其是关注各胚胎发育时期全脑组织变化，经研究发现了一种可获得各发育时期效果理想的石蜡切片的固定液及石蜡切片制备方法。

本发明中，在脱水步骤，用于脱水的乙醇浓度梯度依次为20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％、100％。

本发明中，所述脱水步骤具体为：以20％的乙醇处理55-65分钟，以30％的乙醇处理55-65分钟，以40％的乙醇处理55-65分钟，以50％的乙醇处理55-65分钟，以60％的乙醇处理55-65分钟，以70％的乙醇处理9-10小时，以80％的乙醇处理55-65分钟，以90％的乙醇处理55-65分钟，以95％的乙醇处理55-65分钟，以无水乙醇处理28-32分钟，再以更换后的无水乙醇再次处理28-32分钟。

优选，所述脱水步骤具体为：以20％的乙醇处理1小时，以30％的乙醇处理1小时，以40％的乙醇处理1小时，以50％的乙醇处理1小时，以60％的乙醇处理1小时，以70％的乙醇处理10小时，以80％的乙醇处理1小时，以90％的乙醇处理1小时，以95％的乙醇处理1小时，以无水乙醇处理0.5小时，再以更换后的无水乙醇再次处理0.5小时。