[发明专利]一种UCST型温敏性聚合物固定化酶的方法

权利要求书

1.一种UCST型温敏性聚合物固定化酶的方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：

步骤1，将聚丙烯酸类聚合物和引发剂用去离子水溶解，转移到三口烧瓶中，缓慢加入甲基丙烯酸缩水甘油酯，摇匀后通氮气鼓泡半小时后转入单口烧瓶中，氮气保护下抽真空，进行磁力搅拌反应，待反应结束后，离心去除上层清液，用丙酮重复洗涤，烘干，得到白色的固体产物；

引发剂为过硫酸铵、过硫酸钾或者过硫酸钠；聚丙烯酸类聚合物的结构简式为(C₃O₂H₃-R)_n，其中，R为甲基、乙基、异丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基中的任意一种；

步骤2，将固体产物用缓冲液进行溶解，之后加入酶，进行恒温震荡反应，再加入胶原或其水解物，恒温震荡30min，离心，用去离子水清洗，所得到的沉淀物即为固定酶，将固定酶置于冰箱冷藏，即可完成固定酶；

固体产物、缓冲液、酶、胶原或其水解物的摩尔比为0.1-1：1-10：10-40：0.1-1；

缓冲液为乙酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的任意一种；胶原水解物为明胶或者胶原多肽；酶为纤维素酶、蛋白酶、糖化酶、淀粉酶、木聚糖酶中的任意一种或者多种。

2.根据权利要求1所述的一种UCST型温敏性聚合物固定化酶的方法，其特征在于，所述步骤1中，聚丙烯酸类聚合物、甲基丙烯酸缩水甘油酯、引发剂和去离子水的摩尔比为1-12：0.01-0.024：0.01-0.012：20-480。

3.根据权利要求1所述的一种UCST型温敏性聚合物固定化酶的方法，其特征在于，所述步骤1中，反应温度为50℃-100℃，反应时间为4-24h；烘干温度为0-40℃，烘干时间为10-12h。

4.根据权利要求1所述的一种UCST型温敏性聚合物固定化酶的方法，其特征在于，所述步骤2中，恒温震荡反应温度为40℃-100℃，恒温震荡反应时间2h-24h。