[发明专利]嵌合抗原受体(CAR)修饰的γδT细胞的制备方法、产品、抗肿瘤药物及其应用

权利要求书

1.重组细胞的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括：将重组CAR基因导入出发生物材料，所述出发生物材料为γδT细胞或αβT细胞，

所述重组CAR基因依次包含U6启动子、靶向β2M的shRNA的编码基因、CAR基因，所述靶向β2M的shRNA的编码基因序列如SEQ ID NO.8所示，所述CAR基因包括MND启动子。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述γδT细胞的培养方法包括：1)采用活化培养基培养γδT细胞，所述活化培养基包括基础培养基、OK432、IFN-γ、IL-2、IL-15、IL-21、10％自体血浆；2)采用扩增培养基培养经活化培养基培养的γδT细胞，所述扩增培养基包括所述基础培养基、IL-2、5％自体血浆；

所述基础培养基选自Aly、KBM581和X-VIVO中的一种或多种。

3.权利要求1中所述的重组CAR基因。

4.根据权利要求3所述的重组CAR基因，其特征在于：

所述CAR基因依次包含MND启动子、信号肽编码基因、抗原结合结构域、铰链区及跨膜区的编码基因、共刺激信号转导结构域的编码基因、初级信号传导结构域的编码基因、连接序列的编码基因、安全开关的编码基因、WPRE；

所述抗原结合结构域包括针对CD19的单链抗体；和或

所述共刺激信号转导结构域是4-1BB的胞内信号传导结构域；和/或

所述初级信号传导结构域是CD3ζ的胞内信号传导结构域；和/或

所述信号肽是集落刺激因子信号肽；和/或

所述铰链区及跨膜区是CD8a的铰链区及跨膜区；和/或

所述连接序列是T2A；和/或

所述安全开关是自杀基因tEGFR。

5.根据权利要求4所述的重组CAR基因，其特征在于：

所述MND启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第311-710位所示；和/或

所述针对CD19的单链抗体的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第791-1525位所示；和/或

所述4-1BB的胞内信号传导结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第1736-1861位所示；和/或

所述CD3ζ的胞内信号传导结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第1862-2191位所示；和/或

所述信号肽编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第725-790位所示；和/或

所述CD8a的铰链区及跨膜区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第1526-1735位所示；和/或

所述T2A的核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第2207-2260位所示；和/或

所述tEGFR的核苷酸序列如SEQ ID NO.9中第2261-3334位所示。

6.与权利要求3所述的重组CAR基因相关的生物材料，其特征在于：所述生物材料为下述A1)-A6)中的任一种：

A1)含有权利要求1所述的重组CAR基因的重组载体；

A2)含有权利要求1所述的重组CAR基因的重组微生物；

A3)由A1)所述重组载体制备的重组微生物；

A4)含有A1)所述重组载体的重组微生物；

A5)含有权利要求1所述的重组CAR基因的重组细胞；

A6)含有A1)所述重组载体的重组细胞。

7.一种药物，其特征在于，所述药物包括权利要求3-5中任一所述的重组CAR基因或权利要求6所述的相关生物材料。

8.权利要求3-5中任一所述的重组CAR基因或权利要求6所述的相关生物材料在制备抗肿瘤或治疗自身免疫性疾病或抗免疫排斥的药物中的应用。