[发明专利]一种发酵法高效制备β-葡聚糖的方法、剑菌及其筛选方法

权利要求书

1.一种发酵法制备β-葡聚糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.剑菌(Ensifer)菌种的活化：将剑菌菌种接种到活化培养基上静置恒温培养，取得单菌落；

B.种子活化：从所述活化培养基上刮取单菌落接种到种子培养液中，进行摇瓶培养，至培养液OD600值在0.6-0.9之间时结束培养，得到种子液；

C.发酵培养：将所述种子液接种到与所述步骤B中种子培养液相同的培养基中，进行扩大培养发酵，得到发酵液；

D.分离干燥：将所述发酵液加入乙醇，静置，离心后取沉淀物，干燥后得到β-葡聚糖。

2.根据权利要求1所述的发酵法制备β-葡聚糖的方法，其特征在于，所述步骤A中活化培养基中含有酵母粉0.8-1.2g/L，葡萄糖5.0-10g/L或蔗糖8-13.0g/L，土壤30-50g/L，琼脂12-18.0g/L，pH＝5-11；

所述步骤A中恒温培养的条件为：培养温度为25-30℃；培养时间为2-3天。

3.根据权利要求1所述的发酵法制备β-葡聚糖的方法，其特征在于，所述步骤B中种子培养液为蛋白胨8.0-12.0g/L、酵母粉4.0-6.0g/L和氯化钠8.0-12.0g/L的混合水溶液，pH为5-11。

4.根据权利要求1所述的发酵法制备β-葡聚糖的方法，其特征在于，所述步骤C中种子培养液与种子液的体积比为1:300-1:800；发酵条件为：发酵温度为25-30℃，发酵时间为3-5天。

5.根据权利要求1所述的发酵法制备β-葡聚糖的方法，其特征在于，所述步骤D中发酵液与乙醇的体积比为1：(2-4)，静置时间为2-4h，离心速率为6000-8000rpm，干燥温度为45℃。

6.一种根据权利要求1～5任一项所述的制备β-葡聚糖的方法中所使用的剑菌，其特征在于，所述剑菌(Ensifer)的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

7.根据权利要求6所述的剑菌的筛选方法，其特征在于，包括制备筛选培养基的步骤和摇瓶培养富集产β-葡聚糖菌种的步骤以及筛选具有分泌透明粘液的单菌落扩大培养的步骤。

8.根据权利要求7所述的筛选方法，其特征在于，

所述制备筛选培养基的步骤：

按照酵母粉0.8-1.2g/L，蔗糖8-13.0g/L，土壤30-50g/L，琼脂12-18.0g/L的浓度称取物质，蒸馏水溶解定容，调pH＝5-11，115-121℃灭菌20-30分钟，制成筛选培养基；所述摇瓶培养富集产β-葡聚糖菌种的步骤：

将采集的用于筛选的盐碱土样0.5-1.5g加入到5ml液体培养基中，于28℃摇床中振荡培养2-3天，得到富集产β-葡聚糖的菌种培养物；

所述筛选具有分泌透明粘液的单菌落扩大培养的步骤：

将培养物以总重量的5％接种量涂布于所述筛选培养基上，25-30℃倒置培养2-3天，利用菌落特殊形态，选取具有分泌透明粘液的单菌落转接到5-8ml筛选培养基中扩大培养，25-30℃，150-300rpm震荡培养2-3天得到剑菌菌种。

9.根据权利要求1～5任一所述方法制备的β-葡聚糖。

10.根据权利要求9所述的β-葡聚糖在包括普通食品、保健食品、特殊医学用途配方食品及药品在内的领域中的应用。