[发明专利]一种特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法

权利要求书

1.一种特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法，其特征在于，以体积比为7~9:1~3的乙腈-异丙醇混合溶剂为流动相A，乙腈为流动相B，采用常规C₁₈分析柱进行梯度洗脱，测定全反式维生素A含量；

所述梯度洗脱的具体操作为：在0~2min，所述流动相A与所述流动相B的初始体积比为0:100；在2~42min，所述流动相A与所述流动相B的体积比由0:100，线性匀速变化至30:70；42~52min，所述流动相A与所述流动相B的体积比保持30:70；52~54min，所述流动相A与所述流动相B的体积比由30:70，线性匀速变化至0:100；54~62min，所述流动相A与所述流动相B的体积比保持0:100；

所述梯度洗脱前进行试样溶液制备，具体为：称取试样，置于具塞试管中，加入正已烷，第一次涡旋振荡提取，加入无水乙醇，第二次涡旋振荡提取，混合均匀，取出，打开塞子放气，立即密塞，静置至完全分层；吸取上清液，进行氮吹干，留下遗留物，加入异丙醇溶解所述遗留物，得到试样溶液。

2.如权利要求1所述特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法，其特征在于，以体积比为8:2的乙腈-异丙醇混合溶剂为所述流动相A，乙腈为所述流动相B，进行所述梯度洗脱。

3.如权利要求1所述特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的检测波长为325nm，流速为2.0mL/min，进样体积为20μL，柱温为20~33℃。

4.如权利要求1所述特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法，其特征在于，吸取所述上清液的量为正已烷加入量的四分之一，所述氮吹干的温度条件为40℃以下，所述异丙醇的加入量与所述试样的体积质量比为2ml：10g。

5.如权利要求4所述特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法，其特征在于，所述试样与所述正已烷的质量体积比为10g：15~25ml；所述试样与所述无水乙醇的质量体积比为10g：15~30 ml；振荡为涡旋振荡器振荡，速度为1800~2200r/min，第一次涡旋振荡提取的时间为4~6min，第二次涡旋振荡提取的时间为2~4min。

6.如权利要求1所述特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法，其特征在于，所述梯度洗脱后，记录色谱图，根据全反式维生素A棕榈酸酯对照品的保留时间进行定性，由标准曲线求得试样溶液中全反式维生素A棕榈酸酯的浓度，按下式计算出反式维生素A含量：

式中：

X——试样中反式维生素A含量，单位为微克每百克（μg/100g）；

ρ— —试样溶液中全反式维生素A棕榈酸酯的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V — —样品稀释倍数；

m——试样质量，单位为克（g）；

100——换算百分率系数；

0.5455——转换因子。

7.如权利要求6所述特殊医学用途配方食品中全反式维生素A含量测定的方法，其特征在于，所述标准曲线由标准曲线液在相同条件下梯度洗脱获得，所述标准曲线液的制备包括：

A、精密称取全反式维生素A棕榈酸酯对照品10mg，用异丙醇溶解定容至50mL，得浓度为200μg/mL的标准储备液；

B、精密吸取所述标准储备液1.0mL，加异丙醇稀释至20mL，制得浓度为10μg/mL的对照液，作为标准曲线液Ⅴ；

C、精密吸取所述标准曲线液Ⅴ2.0mL，加异丙醇稀释至5mL，制得浓度为4μg/mL的对照液，作为标准曲线液Ⅳ；

D、精密吸取所述标准曲线液Ⅴ2.0mL，加异丙醇稀释至10mL，制得浓度为2μg/mL的对照液，作为标准曲线液Ⅲ；

E、精密吸取所述标准曲线液Ⅴ2.0mL，加异丙醇稀释至20mL，制得浓度为1μg/mL的对照液，作为标准曲线液Ⅱ；

F、精密吸取所述标准曲线液Ⅴ2.0mL，加异丙醇稀释至50mL，制得浓度为0.4μg/mL的对照液，作为标准曲线液Ⅰ。