[发明专利]一种胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白及其单克隆抗体和制备方法及应用在审
| 申请号： | 202110390444.0 | 申请日： | 2021-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN113046324A | 公开（公告）日： | 2021-06-29 |
| 发明（设计）人： | 黎榕萍 | 申请（专利权）人： | 黎榕萍 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N9/64;C12N15/85;C07K16/40;G01N33/573 |
| 代理公司： | 广州京诺知识产权代理有限公司 44407 | 代理人： | 刘菊欣 |
| 地址： | 526600 广东省肇庆*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胃蛋白酶 重组 蛋白 及其 单克隆抗体 制备 方法 应用 | ||
1.一种CHO-K1细胞株，其特征在于，所述的CHO-K1细胞株含有能高效分泌表达胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白的基因。
2.根据权利要求1所述的CHO-K1细胞株，其特征在于，所述的的胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白的基因是经过密码子优化后的核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的CHO-K1细胞株，其特征在于，所述的密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种制备如权利要求1～3任一所述的CHO-K1细胞株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表达载体中，以得到含有胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白编码基因的重组质粒；
2)再将所述重组质粒转染至CHO-K1细胞中，以得到CHO-K1细胞株；
3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述CHO-K1细胞株，以得到高效分泌表达胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白的细胞株。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的真核表达载体为pEE12.4。
6.一种抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体，所述的抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体是使用权利要求1所述的CHO-K1细胞株表达的胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白制备的，其特征在于，所述的单克隆抗体1结合的抗原表位位于胃蛋白酶原Ⅱ的aa78-aa90；所述的aa78-aa90的氨基酸序列为SerIleGlyThrProProGlnAsnPheLeuValLeuP he；所述的单克隆抗体2结合的抗原表位位于胃蛋白酶原Ⅱ的aa280-aa291；所述的aa280-aa291的氨基酸序列为SerLeuLeuThrValProGlnGlnTyrMetSerAla。
7.根据权利要求6所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体均为IgG1亚型。
8.一种如权利要求1～3任一权利要求所述的CHO-K1细胞株在大规模制备胃蛋白酶原Ⅱ重组蛋白中的应用。
9.一种如权利要求6～7任一权利要求所述的单克隆抗体在制备用于胃蛋白酶原Ⅱ诊断试剂中的应用。
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