[发明专利]一种牛乳蛋白和水牛乳蛋白二联检测卡的制备方法及应用

说明书

本发明提供一种牛乳蛋白和水牛乳蛋白二联检测卡的制备方法及应用，制备方法包括以下步骤：分别制备抗牛乳蛋白特异性单克隆抗体和抗水牛乳蛋白特异性单克隆抗体，分别记作：Anti‑CC和Anti‑BC；制备抗牛乳蛋白和抗水牛乳蛋白共同位点的单克隆抗体，记作：Anti‑total；将抗牛乳蛋白和抗水牛乳蛋白共同位点的单克隆抗体标记胶体金获得抗体胶体金标记物；通过抗体胶体金标记物制备二联检测卡。该二联检测卡包括PVC背衬，所述PVC背衬上依次设置有样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫，并且所述二联检测卡的样品垫上设置有样品孔；所述反应垫上设有检测线。本发明的检测卡特异性好，灵敏度高，抗基质干扰效果好，检测结果准确性好，重复性好，可现场快速鉴定食品中的牛乳蛋白和水牛乳蛋白。

技术领域

本发明涉及牛乳检测技术领域，具体涉及一种牛乳蛋白和水牛乳蛋白二联检测卡的制备方法及应用。

背景技术

水牛奶有“奶中之王”的美誉，与普通牛奶相比具有高营养价值、饲养成本高、低产量等特点。我国水牛产业起步晚，基础差，目前全国现存奶水牛约2万头，不到全国水牛总量的0.1％，主要集中在广东、广西、云南、福建等地。鲜水牛奶的收购价格为一般牛奶的2-3倍，因此一些不法养殖户和厂家由于利益的驱使在水牛乳中掺入普通牛乳。欧盟等水牛产业发达地区已经有水牛奶掺伪牛乳的相关报道及研究，而国内这方面研究仍属于空白。

发明内容

针对目前国内水牛乳快速鉴别技术的空白，本发明提供一种牛乳蛋白和水牛乳蛋白二联检测卡的制备方法及应用。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一种牛乳蛋白和水牛乳蛋白二联检测卡的制备方法，包括以下步骤：

分别制备抗牛乳蛋白特异性单克隆抗体和抗水牛乳蛋白特异性单克隆抗体，分别记作：Anti-CC和Anti-BC；

制备抗牛乳蛋白和抗水牛乳蛋白共同位点的单克隆抗体，记作：Anti-total；

将抗牛乳蛋白和抗水牛乳蛋白共同位点的单克隆抗体标记胶体金获得抗体胶体金标记物；

通过抗体胶体金标记物制备二联检测卡。

进一步地，所述制备抗牛乳蛋白特异性单克隆抗体，具体包括：

(1)通过软件设计得到牛乳κ-酪蛋白半抗原的氨基酸序列为：ESPPEINTVQVTSAV-Asp(SEQ ID NO：1)；

(2)将所述牛乳κ-酪蛋白半抗原与苯甲酸预活化的多聚赖氨酸偶联得到免疫原；再将获得的免疫原通过杂交瘤方法制备抗牛乳κ-酪蛋白单克隆抗体，该抗体识别位点为抗牛乳κ-酪蛋白的ESPPEINTVQVTSAV氨基酸序列。

进一步地，所述制备抗水牛乳蛋白特异性单克隆抗体，具体包括：

(1)通过软件设计得到水牛乳κ-酪蛋白半抗原的氨基酸序列为：ESVPETNTAQVTSTVV-Asp(SEQ ID NO：2)；

(2)将所述水牛乳κ-酪蛋白半抗原与苯甲酸预活化的多聚赖氨酸偶联得到免疫原；再将获得的免疫原通过杂交瘤方法制备抗水牛乳κ-酪蛋白单克隆抗体，该抗体识别位点为抗水牛乳κ-酪蛋白的ESVPETNTAQVTSTVV氨基酸序列。

进一步地，所述制备抗牛乳蛋白和抗水牛乳蛋白共同位点的单克隆抗体，具体包括：

(1)根据牛乳κ-酪蛋白和水牛乳κ-酪蛋白共同位点，通过软件确定该共同位点的半抗原氨基酸序列为：INNQFLPYPYYAKP-Asp(SEQ ID NO：3)；