[发明专利]IL1B和IL1A基因人源化的非人动物及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种IL1B基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述非人动物的基因组中包含人或人源化IL1B基因，所述的人源化IL1B基因包含人IL1B基因的部分，优选的，所述的构建方法包括用包含人IL1B基因的部分导入非人动物IL1B基因座，进一步优选的，所述的非人动物体内表达人或人源化IL1B蛋白，所述的非人动物的内源IL1B蛋白的表达降低或缺失。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化IL1B蛋白包含人IL1B蛋白的全部或部分，所述的人源化IL1B蛋白选自下列组中的一种：

1)所述的人源化IL1B蛋白中来源于人IL1B蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的全部或部分；

2)所述人源化IL1B蛋白中来源于人IL1B蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：4所示氨基酸序列同一性至少为70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

3)所述人源化IL1B蛋白中来源于人IL1B蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：4所示氨基酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸；

4)所述人源化IL1B蛋白中来源于人IL1B蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：4所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列；

5)所述人源化IL1B蛋白中来源于非人动物IL1B蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的部分；

6)所述人源化IL1B蛋白中来源于非人动物IL1B蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列同一性至少为70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

7)所述人源化IL1B蛋白中来源于非人动物IL1B蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸；或

8)所述人源化IL1B蛋白中来源于非人动物IL1B蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：2所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，

优选的，所述的人IL1B基因的部分包含1号至7号外显子的全部或部分；优选的，所述的人IL1B基因的部分包含1号至7号外显子中任一个或两个或三个以上外显子的组合的全部或部分；进一步优选的，所述的人IL1B基因的部分包含1号至7号外显子中连续两个或连续三个以上外显子的组合的全部或部分；更进一步优选的，所述的人IL1B基因的部分包含2号至7号外显子的全部或部分；最为优选的，所述的人IL1B基因的部分包含2号外显子的部分、3号至6号外显子的全部和7号外显子的部分，其中，2号外显子的部分至少包含10bp的核苷酸序列，7号外显子的部分至少包含100bp的核苷酸序列，优选的，所述的构建方法包括将人IL1B基因的部分导入非人动物2号至7号外显子，进一步优选的，所述的人源化IL1B基因包含编码人IL1B蛋白的cDNA，更优选的，所述的人源化IL1B基因还包含人IL1B非编码区，优选的，所述的人源化IL1B基因包含的人IL1B基因的部分核苷酸序列选自下列组中的一种：

(I)为SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的全部或部分；

(II)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的同一性至少为70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

(III)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或

(IV)具有SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列，优选的，所述的人源化IL1B基因的核苷酸序列选自下列组中的一种：

I)转录的mRNA序列为SEQ ID NO：3第88-897位所示核苷酸序列的全部或部分；

II)转录的mRNA序列与SEQ ID NO：3第88-897位所示的核苷酸序列的同一性至少为70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

III)转录的mRNA序列与SEQ ID NO：3第88-897位所示的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或

IV)转录的mRNA序列与SEQ ID NO：3第88-897位所示的核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列，

优选的，使用靶向载体进行非人动物的构建；优选的，所述的靶向载体包含供体DNA序列，所述的供体DNA序列包含人IL1B基因的部分；其中，所述的人IL1B基因的部分包含1号至7号外显子的全部或部分；优选的，所述的人IL1B基因的部分包含2号外显子的部分、3号至6号外显子的全部和7号外显子的部分，其中，2号外显子的部分至少包含10bp的核苷酸序列，7号外显子的部分至少包含100bp的核苷酸序列，

优选的，所述供体DNA序列包含下列组中的任一种：

(1)为SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的全部或部分；

(2)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的同一性至少为70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

(3)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；

(4)具有SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列；

(5)转录的mRNA序列为SEQ ID NO：3第88-897位所示核苷酸序列的全部或部分；

(6)转录的mRNA序列与SEQ ID NO：3第88-897位所示核苷酸序列的同一性至少为70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

(7)转录的mRNA序列与SEQ ID NO：3第88-897位所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或

(8)转录的mRNA序列具有SEQ ID NO：3第88-897位所示核苷酸序列的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列，

进一步优选的，所述的靶向载体还包含与待改变的转换区5’端同源的DNA片段，即5’臂，其选自非人动物IL1B基因基因组DNA的100-10000个长度的核苷酸；优选的，所述的5’臂与NCBI登录号为NC_000068.7至少具有90％同源性的核苷酸；进一步优选的，所述5’臂序列与SEQ ID NO：6至少具有90％同源性，或者如SEQ ID NO：6所示；和/或，所述的靶向载体还包含与待改变的转换区3’端同源的DNA片段，即3’臂，其选自非人动物IL1B基因基因组DNA的100-10000个长度的核苷酸；优选的，所述的3’臂与NCBI登录号为NC_000068.7至少具有90％同源性的核苷酸；进一步优选的，所述的3’臂序列与SEQ ID NO：7至少具有90％同源性，或者如SEQ ID NO：7所示；和/或，所述的靶向载体还包含非人动物3’UTR,

任选地，所述非人动物为杂合动物或纯合动物，优选的，所述的非人动物为小鼠。