[发明专利]一种快速质粒DNA抽提纯化试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种快速质粒DNA抽提纯化试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括如下试剂：重悬液、裂解液、中和液、清洗液、洗脱液；

所述裂解液的配方如下：氢氧化钾或氢氧化钠100mM-2M，十二烷基苯磺酸钠或十二烷基磺酸钠或十二烷基硫酸钠1g/100ml；

所述中和液的配方如下：盐酸胍1M-6M，醋酸钾或醋酸钠100mM-1M，醋酸调节pH至2-8。

2.根据权利要求1所述的快速质粒DNA抽提纯化试剂盒，其特征在于，所述重悬液的配方如下：葡萄糖100mM，三羟甲基氨基甲烷盐酸10mM，乙二胺四乙酸10mM，核糖核酸酶5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的快速质粒DNA抽提纯化试剂盒，其特征在于，所述清洗液的配方如下：三羟甲基氨基甲烷盐酸1-50mM，pH6.8，体积分数为乙醇70-85％。

4.根据权利要求1所述的快速质粒DNA抽提纯化试剂盒，其特征在于，所述洗脱液的配方如下：乙二胺四乙酸1-10mM，三羟甲基氨基甲烷盐酸8-12mM，pH8-9。

5.根据权利要求1所述的快速质粒DNA抽提纯化试剂盒，其特征在于，所述裂解液的配方如下：十二烷基苯磺酸钠1g/100mL，氢氧化钠0.1M。

6.根据权利要求1所述的快速质粒DNA抽提纯化试剂盒，其特征在于，所述中和液的配方如下：盐酸胍5M，醋酸钠0.75M，醋酸调PH至5.0。

7.权利要求1所述快速质粒DNA抽提纯化试剂盒在质粒提取中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)菌体重悬：取2mL过夜培养的细菌溶液，4000rpm离心2min，弃上清，在沉淀的菌体中加入所述的重悬液的重悬液，充分震荡混匀；

(2)菌体裂解：将所述的裂解液加到充分重悬的菌体中，轻柔混匀至菌液清亮；

(3)中和沉淀：将所述的中和液加入步骤(2)裂解清亮的菌体中，上下翻倒离心小管5-10次，混合后出现沉淀，离心，弃沉淀，取上清挂硅胶柱；

(4)清洗：将步骤(3)结合质粒DNA的硅胶膜上加入所述的清洗液700μl，以4000rpm离心1min，弃除离心液。

(5)洗脱：加入40μL所述的洗脱液于DNA结合柱中心，以4000rpm离心1min，即可得到高纯度质粒DNA。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述离心的条件为：4000rpm离心10min。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述重悬液的加入量为250μL；步骤(2)中，所述裂解液的加入量为250μL；步骤(3)中，所述中和液的加入量为250μL。