[发明专利]一种荧光探针及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种荧光探针，其具有如式(I)所示的结构，

包括：配体部分A，连接体部分C和荧光染料部分，所述荧光染料部分为粘度响应性荧光染料基团，包括电子供体部分D、共轭体系B和电子受体部分，所述配体部分A为能够与蛋白标签或融合蛋白标签的靶蛋白特异性识别并共价标记的基团；其特征在于，所述配体部分A通过连接体部分C共价连接于荧光染料部分的电子供体部分D；

所述配体部分A-选自下式结构：

其中，连接体部分C为-(C＝O)-；

所述荧光染料部分具有式(I-R)所示的结构，

其中：

电子供体部分-D-为-X₂-NX₁，X₁选自氢或烷基，X₂为改性亚烷基，所述改性亚烷基为亚烷基的任意碳原子被选自-O-基团置换所得的基团，所述改性亚烷基具有1～30个碳原子；

所述共轭体系B选自下式(I-1-4)、(I-1-6)～(I-1-10)、(I-1-20)、(I-1-21)、(I-1-25)～(I-1-28)中的结构：

电子受体部分具有如下式(I-2)所示的结构，

其中，

R₁选自氢；

R₂选自羧基、杂芳基或改性烷基，所述改性烷基为烷基的任意碳原子被选自-O-、-CO-中的至少一种基团置换所得的基团，所述改性烷基具有1～30个碳原子；

R₃为氰基；

其中，

所述杂芳基或芳香杂环为环上含有选自N、O或S中的至少一种杂原子的5～10元稠合双环。

2.根据权利要求1所述的荧光探针，其中，

所述式(I-2)结构为选自下式中的一种：

3.根据权利要求1或2所述的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针选自下式化合物：

4.制备权利要求1-3任一项所述的荧光探针的方法，其特征在于，包括式(II)所示荧光染料与配体以及任选的连接体发生反应的步骤：

其中，D’反应后能够形成电子供体部分D-与连接基团键合。

5.一种荧光激活型蛋白特异性标记方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1-3任一项所述的荧光探针与蛋白标签或者融合蛋白标签的靶蛋白接触，所述荧光探针的配体部分与蛋白标签发生标记反应，将荧光探针标记到蛋白标签上；所述将荧光探针标记到蛋白标签上为共价标记；

所述标记方法为非用于疾病的治疗或诊断的方法。

6.根据权利要求5所述的荧光激活型蛋白特异性标记方法，其特征在于，所述标记反应的反应介质选自纯蛋白溶液、细胞裂解液或蛋白标签或融合蛋白标签的靶蛋白所处在的原位介质。

7.根据权利要求6所述的荧光激活型蛋白特异性标记方法，其特征在于，所述原位介质为细胞内介质、细胞器内介质、活体组织介质、血液或体液。

8.权利要求1-3任一项所述的荧光探针在蛋白荧光标记，蛋白的定量、检测或动力学研究，以及细胞、组织、活体影像中的用途，所述用途为非用于疾病的治疗或诊断方法的用途。

9.一种探针试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的荧光探针；

所述探针试剂盒还包含生物相容性介质；所述生物相容性介质选自二甲基亚砜、缓冲剂、生理盐水中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的探针试剂盒，其特征在于，所述缓冲剂包括磷酸盐缓冲液。