[发明专利]FUT3基因作为靶点在提高猪对大肠杆菌抗性中的应用

权利要求书

1.FUT3基因作为靶点在制备用于提高猪对大肠杆菌或细菌性腹泻抗性的试剂中的应用。

2.FUT3基因在作为提高猪细菌性腹泻抗性功能基因中的应用。

3.FUT3基因在仔猪抗大肠杆菌腹泻病的分子选育中的应用。

4.干扰、抑制、沉默或敲除FUT3基因的物质或者以FUT3基因为靶点降低FUT3基因表达的化学药物在制备用于提高猪对大肠杆菌或细菌性腹泻抗性的试剂中的应用。

5.根据权利要求1～3中任一所述的应用，其特征在于：以FUT3基因作为靶点采用基因干扰或敲除技术降低猪FUT3基因的表达或者采用化学药物抑制猪FUT3基因的表达，提高猪对大肠杆菌或细菌性腹泻的抗性，或者培育抗大肠杆菌腹泻病的仔猪品种。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：用于提高猪对大肠杆菌或细菌性腹泻抗性的试剂中包含能够干扰、抑制、沉默或敲除FUT3基因的物质。

7.一种干扰、抑制、沉默或敲除FUT3基因的物质，其特征在于，它包含以下(1)～(7)中的至少一种：

(1)针对FUT3基因的干扰序列；

(2)用于干扰的FUT3基因的干扰载体；

(3)包含有FUT3基因干扰载体的转基因细胞系；

(4)基于CRISPR/Cas9技术靶向敲除猪FUT3基因的sgRNA向导序列；

(5)基于CRISPR/Cas9技术靶向敲除猪FUT3基因的敲除载体；

(6)基于CRISPR/Cas9技术特异性靶向敲除猪FUT3基因的细胞系；

(7)以FUT3基因为靶点降低FUT3基因表达的化学药物。

8.根据权利要求7所述的干扰、抑制或敲除FUT3基因的物质，其特征在于，所述的针对FUT3基因的干扰序列为RNAi-1～4中的任意一组：

所述的基于CRISPR/Cas9技术靶向敲除猪FUT3基因的sgRNA向导序列为sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3和sgRNA4中的至少一种：

sgRNA1：caccGGCGCCGCTGTGGTCTGGCAG

sgRNA2：caccGGCAGCAGAAGCAGGGGTGGG

sgRNA3：caccGGGTGGCTGTGTCTCGCTGCT

sgRNA4：caccGCCAGCTGACTGACAACCGCG。

9.根据权利要求8所述的干扰、抑制、沉默或敲除FUT3基因的物质，其特征在于，所述的基于CRISPR/Cas9技术靶向敲除猪FUT3基因的sgRNA向导序列与各自的反向互补序列退火形成多组双链DNA，各组所述的sgRNA向导序列与其各自的反向互补序列的核苷酸序列如下所示：

10.根据权利要求7所述的干扰、抑制、沉默或敲除FUT3基因的物质，其特征在于，

所述的用于干扰的FUT3基因的干扰载体的制备方法为：将所设计的针对FUT3基因的干扰序列的正义链和反义链退火形成双链DNA，将双链DNA产物和线性化的shRNA表达载体进行连接得到干扰载体；

所述的基于CRISPR/Cas9技术靶向敲除猪FUT3基因的敲除载体的制备方法为：将所设计的sgRNA向导序列与其各自的反向互补序列退火形成双链DNA，将双链DNA与线性化载体进行T4 DNA Ligase连接反应得到敲除载体；

所述的包含有FUT3基因干扰载体的转基因细胞系为将所述的干扰载体转染靶细胞IPEC-J2得到；

所述的基于CRISPR/Cas9技术特异性靶向敲除猪FUT3基因的细胞系为将所述的敲除载体转染靶细胞IPEC-J2得到。