[发明专利]一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法

权利要求书

1.一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用一步法培养人参不定根，包括：将成熟人参清洗消毒，切片，接种到诱导培养基中诱导出人参不定根；将获得的人参不定根再次接种到诱导培养基中继代培养扩繁；然后将获得的人参不定根剪切成段，接种到液体培养基中培养获得不定根；

所述诱导培养基包括1-6mg/L萘乙酸，0.2-1mg/L赤霉素，0.1-0.6mg/L激动素，0.075-1.5g/L柠檬酸，0.03-1g/L抗坏血酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-4g/L B5培养基和1-2.4g/LWPM培养基；

(2)取人参不定根的根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；

(3)将处理后的人参不定根根尖部分先放入干细胞诱导培养基中培养，然后转入干细胞扩繁固体培养基中培养；所述干细胞诱导培养基包括0.6-1mg/L激动素，2-4mg/L吲哚乙酸，0.5-1.5mg/L萘乙酸，25-100mg/L抗坏血酸，50-150mg/L柠檬酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-2.4g/L 1/2MS培养基，0.6-1.4g/L WPM培养基；

所述干细胞扩繁固体培养基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L萘乙酸，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/L WPM培养基；

(4)收集(3)中得到的人参干细胞，接种到含干细胞液体培养基的摇瓶中，100-140rpm，暗培养；所述干细胞液体培养基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L萘乙酸，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/L WPM培养基；

(5)将(4)获得的干细胞接种到含有干细胞液体培养基的生物反应装置中，暗培养，获得人参干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，在生物反应装置中进行培养时，通气量为0.02-0.2vvm。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，通气量为0.05-0.15vvm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，生物反应装置包括罐体，所述罐体的底部包括至少两个进气装置。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，罐体的底壁的高度由四周向中心逐渐降低，形成上大下小的倒锥形；出料口设置在中心最低的位置，进气装置围绕出料口间隔均匀分布在由四周向中心逐渐降低的底壁上。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，将干细胞接种到生物反应装置的干细胞液体培养基中时，接种的干细胞的质量占干细胞扩繁液体培养基体积的1.0％-10.0％。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，接种的干细胞的质量占干细胞扩繁液体培养基体积的2.0％-8.0％。

8.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，取人参不定根的根尖部分，置于渗透剂溶液中，低温处理1-10小时。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述低温为1-6℃。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述低温为4℃。

11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述人参不定根的根尖部分的长度为0.3mm-0.8mm。

12.根据权利要求1-5任意一项所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，所述渗透剂溶液选自蔗糖溶液、氯化钾溶液、甘露醇溶液中的至少一种。