[发明专利]一种快速区分稻瘟病菌交配型的PCR-HRM检测方法

说明书

本发明提供了一种快速区分稻瘟病菌交配型的PCR‑HRM检测方法，属于分子生物学检测技术领域，所述引物组包括MAT1‑1扩增引物组和MAT1‑2扩增引物组。本发明的引物组扩增得到的交配型熔解曲线能够分型，检测效果好。基于本发明的引物组进行荧光PCR扩增得到的扩增产物进行熔解曲线分析，获得熔解温度，依据熔解温度能够快速、准确区分稻瘟病菌交配型。本发明首次提供了一种可快速检测稻瘟病菌交配型的荧光PCR‑HRM检测引物组，能够简化检测流程，实现高通量检测，显著缩短检测所需时间，适用于大批量的稻瘟病菌交配型的快速检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种快速区分稻瘟病菌交配型的PCR-HRM检测方法。

背景技术

有性生殖是真菌的一种生殖方式，分为同宗配合(Homothalllism)和异宗配合(Heterothallism)。同宗配合的子囊真菌通常具有一个交配型基因座，而异宗配合的子囊真菌有一对交配型基因座。异宗配合真菌必须由不同交配型的菌丝细胞结合后才能产生子代。异宗配合的子囊真菌具有MAT1-1和MAT1-2两个高度异源的交配型基因位点，因此，可通过检测MAT1-1和MAT1-2基因来判读异宗配合的子囊真菌的交配型。

由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是世界各水稻生产区内广泛发生、且危害极大的一种真菌性病害。稻瘟病菌属子囊菌广大角间座壳属的异宗配合真菌，具有MAT1-1和MAT1-2两种交配型。目前检测交配型的方法主要是利用常规PCR扩增后进行琼脂糖凝胶电泳检测，电泳过程中，需要实验人员逐一进行点样，根据条带大小进行区分，这一方法检测效率较低，难以实现批量化检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速区分稻瘟病菌交配型的PCR-HRM检测方法，通过荧光PCR扩增和高分辨率熔解曲线能够区分稻瘟病菌交配型。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种快速区分稻瘟病菌交配型的荧光PCR-HRM检测引物组，包括MAT1-1扩增引物组和MAT1-2扩增引物组；

所述MAT1-1扩增引物组包括MAT1-1-F和MAT1-1-R；

所述MAT1-1-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述MAT1-1-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述MAT1-2扩增引物组包括MAT1-2-F和MAT1-2-R；

所述MAT1-2-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述MAT1-2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明提供了一种包括上述方案所述引物组的荧光PCR-HRM检测试剂盒，所述试剂盒还包括用于荧光PCR扩增的试剂。

本发明提供了一种基于上述方案所述引物组或者上述方案所述试剂盒的荧光PCR-HRM检测区分稻瘟病菌交配型的方法，包括以下步骤：

1)提取待区分稻瘟病菌的基因组DNA；

2)以所述待区分稻瘟病菌的基因组DNA为模板，采用所述引物组进行荧光PCR扩增反应，得到待区分稻瘟病菌荧光PCR扩增产物；

3)对所述待区分稻瘟病菌荧光PCR扩增产物进行熔解曲线分析，得到待区分稻瘟病菌熔解温度；

当所述待区分稻瘟病菌熔解温度为78～80℃时，则所述待区分稻瘟病菌为MAT1-1交配型；当所述待区分稻瘟病菌熔解温度为82～84℃时，则所述待区分稻瘟病菌为MAT1-2交配型。