[发明专利]一种地加瑞克的纯化方法

说明书

本发明公开了一种地加瑞克的纯化方法，该方法包括溶解、第一次纯化、第二次纯化、第三次纯化、浓缩和冷冻干燥等步骤。利用地加瑞克在较高温度下比一般多肽稳定的特点，对纯化制备柱进行保温措施，并对纯化馏分用适合溶剂稀释再进入下一步纯化的方法，提高了操作效率，降低了纯化设备和纯化填料的损耗，尤其是在大规模生产中能明显降低纯化填料的成本；通过使用高效液相色谱法，选用了合适的纯化流动相提高了纯化分离效果，得到了高纯度的地加瑞克成品，纯化收率高。本发明方法适合地加瑞克的大规模产业化生产，产品纯度高，杂质小，收率高。

技术领域

本发明属于地加瑞克粗品提纯技术领域，具体涉及一种地加瑞克的纯化方法。

背景技术

地加瑞克，英文名：Degarelix，其肽序为：Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser-4-Aph(L-Hor)-D-4-Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH₂。其结构式如式(1)所示：

地加瑞克(Degarelix)是一种促性腺激素释放激素(GnRH)受体抑制剂类药物，可逆性抑制垂体GnRH受体来减少促性腺激素释放继而抑制睾酮的释放。通过抑制对前列腺癌持续生长至关重要的睾酮来延缓前列腺癌的生长和恶化。其由Ferring(辉凌)公司研制开发，经美国食品药品管理局(FDA)批准，于2008年12月24日在美国上市，商品名为Firmagon。

目前关于地加瑞克的合成方法种类较多，但由于地加瑞克的肽序中含有7个非天然氨基酸，且所述氨基酸均为疏水性氨基酸，所得地加瑞克粗品中副产物和粗肽杂质均比较多，对分离纯化的工艺要求非常高。当前，公开的文献中对地加瑞克粗品的分离纯化工艺记载较少，且多以重结晶的形式进行分离纯化，对此，本发明希望提供一种新的地加瑞克提纯方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种地加瑞克的纯化方法，以解决上述背景技术中提出的问题，其具体方案如下。

一种地加瑞克的纯化方法，包括以下步骤：

一、溶解：将通过固相合成得到的地加瑞克粗肽溶解于乙酸水溶液、乙腈水溶液或乙醇水溶液；

二、第一次纯化：取八烷基键合硅胶作为色谱柱填料，流动相分为A₁相和B₁相，对步骤一中所得溶液进行梯度洗脱，收集一纯合格馏分，取乙酸水溶液、乙腈水溶液或乙醇水溶液对一纯合格馏分稀释一倍体积以上，得到一纯稀释馏分；其中，A₁相为乙酸水溶液，所述B₁相为制备级乙腈；

三、第二次纯化：取十八烷基键合硅胶作为色谱柱填料，流动相分为A₂相和B₂相，对一纯稀释馏分进行梯度洗脱，收集二纯合格馏分，取乙酸水溶液、乙腈水溶液或乙醇水溶液对二纯合格馏分稀释一倍体积以上，得二纯稀释馏分；其中，所述A₂相为三氟乙酸-三乙胺缓冲液，所述B₂相为制备级乙腈；

四、第三次纯化：取十八烷基键合硅胶作为色谱柱填料,流动相分为A₃相和B₃相，对二纯稀释馏分进行梯度洗脱，收集三纯合格馏分，取乙酸水溶液、乙腈水溶液或乙醇水溶液对三纯合格馏分稀释一倍体积以上，得三纯稀释馏分；其中，所述A₃相为醋酸铵缓冲液，B₃相为制备级乙腈；

五、对三纯稀释馏分进行柱浓缩与减压旋蒸浓缩；

六、将减压浓缩后的肽溶液加入适量叔丁醇水溶液，经过滤后得滤液进行冷冻干燥得到粉末状地加瑞克成品。

所述步骤二中所述流动相A₁中的乙酸为1‰-3‰(V/V)。