[发明专利]一种基于MALDI-TOF/TOF和多元素分析技术相结合的大豆原产地溯源鉴别方法

权利要求书

1.一种基于MALDI-TOF/TOF和多元素分析技术相结合的大豆原产地溯源鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.标准样品制备：选取具有明确地区的不同产地的大豆样品，每个产地的所述大豆样品分别经压榨后得到标准大豆油样品和经研磨后得到标准大豆粉样品，所述大豆样品来源于至少两个不同产地；

S2.标准样品的质谱数据和矿质元素含量数据采集：用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪分别采集不同产地的所述标准大豆油样品的质谱数据信息，获得所述标准大豆油样品的高分辨质谱数据，每6个标准大豆油样品使用聚乙二醇校准一次，每个标准大豆油样品平行测定三次，将靶板置于所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪中用正离子模式进行质谱数据采集；以及用矿质元素含量分析仪采集不同产地的所述标准大豆粉样品的质谱数据信息，获得所述标准大豆粉样品的矿质元素含量数据；

S3.标准大豆油样品靶向化合物的确定：将步骤S2获得的高分辨质谱数据中的甘油三酯化合物质谱数据与脂类化合物数据库中的标准甘油三酯化合物数据进行匹配，确定所述标准样品的甘油三酯靶向化合物；

S4.大豆产地溯源鉴定模型建立：确定标准大豆油样品中甘油三酯靶向化合物后，将甘油三酯靶向化合物对应的甘油三酯化合物高分辨质谱数据通过分析软件进行归一化和平均处理，将同一产地大豆的标准大豆油样品归一化和平均处理后的数据和标准大豆粉样品的矿质元素含量数据同时导入建模软件进行主成分分析法、偏最小二乘法-判别分析法和正交偏最小二乘法回归分析法中的一种或多种方式处理，然后依次将不同产地大豆的标准大豆油样品归一化和平均处理后的数据和标准大豆粉样品的矿质元素含量数据均导入建模软件中，以获得不同产地标准大豆油样品中大豆油脂特征分布规律以及标准大豆粉样品矿质元素分布规律，构建基于MALDI-TOF/TOF和矿质元素含量分析相结合的大豆产地溯源鉴定模型；

S5.结果预测：将待检测大豆样品分别经过压榨得到待检测大豆油样品和经研磨后得到待检测大豆粉样品，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪采集待检测大豆油样品的甘油三酯化合物高分辨质谱数据，以及用矿质元素含量分析仪采集待所述待检测大豆粉样品的矿质元素含量数据；将待检测大豆样品的甘油三酯化合物高分辨质谱数据和矿质元素含量数据同时导入步骤S4的所述大豆产地溯源鉴定模型中，进行待检测大豆的产地溯源预测；

所述步骤S3的确定靶向化合物的方法包括：根据所述高分辨质谱数据中的目标物分子量范围，将大豆油样品中的高分辨质谱数据分为2个区域：分子量在800-1000的第一区域，分子量在700-800的第二区域，所述第一区域与第二区域是大豆油油脂代谢特征区域，将脂类化合物数据库中的分子量范围在700-950之间的动植物来源甘油三酯化合物与第一区域和第二区域中的大豆油甘油三酯化合物进行匹配筛选，确定分子量范围在850-930Da之间的64个大豆油中的甘油三酯化合物为甘油三酯靶向化合物；

所述步骤S4中还包括对大豆产地溯源鉴定模型的优化步骤，所述优化步骤包括：通过大豆产地溯源鉴定模型的VIP值确定所述甘油三酯靶向化合物中贡献度大的部分甘油三酯化合物，并根据hotelling’s和DModx指标，删除超出99％置信区间的异常值样品，以及删除在鉴定模型中出现数目少的所在地区的全部大豆油样品，以优化大豆产地溯源鉴定模型，最终选取38个甘油三酯化合物作为优选后的甘油三酯靶向化合物，包括分子量如下的甘油三酯化合物：853.7、854.7、875.7、876.7、877.7、878.7、879.7、880.7、881.7、882.8、883.7、893.7、894.7、895.7、896.7、897.7、898.7、899.7、900.7、901.7、902.7、903.7、904.7、905.7、906.7、907.7、909.7、915.7、916.7、917.7、918.7、919.7、920.7、921.7、922.7、923.7、908.7；以及通过大豆产地溯源鉴定模型的VIP值确定所述标准大豆粉样品中贡献度大的部分矿质元素，选取27种元素作为优化后的特征贡献度元素，大豆样品中的特征贡献度元素包括Sr、As、Ni、Cd、Mo、Se、Cs、Cr、Mn、Tl、Zr、Co、Be、U、V、Al、Eu、Na、Ce、Cu、Nd、P、Gd、Sn、Sc和I元素，用优选后的甘油三酯靶向化合物和特征贡献度元素数据建立优化后的基于MALDI-TOF/TOF和矿质元素含量分析相结合的大豆产地溯源鉴定模型；

将同一产地大豆的标准大豆油样品归一化和平均处理后的数据和标准大豆粉样品的矿质元素含量数据同时导入建模软件进行正交偏最小二乘法回归分析法处理，构建基于MALDI-TOF/TOF和矿质元素含量分析相结合的OPLS-DA大豆产地溯源鉴定模型。