[发明专利]一种细胞基因组稳定性的调控方法及其应用

权利要求书

1.一种细胞基因组稳定性的调节方法，其特征在于，所述调节方法包括：

采用含20-200ng/mL VEGF调节因子的ECM培养基对细胞培养6-1000h，所述VEGF调节因子为VEGF蛋白、VEGF抗体中的一种。

2.根据权利要求1所述一种细胞基因组稳定性的调节方法，其特征在于，所述VEGF蛋白为VEGF-B蛋白，所述VEGF抗体为VEGF-B中和抗体。

3.根据权利要求2所述一种细胞基因组稳定性的调节方法，其特征在于，所述VEGF-B蛋白为重组人VEGF-B蛋白。

4.根据权利要求1所述一种细胞基因组稳定性的调节方法，其特征在于，所述调节方法具体包括：

步骤1：采用ECM完全培养基进行细胞培养，至80％以上密度；

步骤2：采用无ECGS的ECM培养基对步骤1所得细胞进行饥饿处理2-6h；

步骤3：向步骤2培养基中加入VEGF调节因子，使VEGF调节因子含量达到20-200ng/mL，培养12h。

5.根据权利要求4所述一种细胞基因组稳定性的调节方法，其特征在于，所述步骤2中无ECGS的ECM培养基含0.5％FBS。

6.根据权利要求1所述一种细胞基因组稳定性的调节方法，其特征在于，所述ECM培养基为ECM完全培养基。

7.一种应用权利要求1-6任一项所述细胞基因组稳定调节方法的细胞基因组稳定性检测方法，其特征在于，所述细胞基因组稳定性检测方法包括：

步骤1：取VEGF调节因子培养后的细胞，采用PBS对细胞进行清洗，并使用0.05％胰酶消化2-5分钟，加入1-5mL 0.5％FBS的ECM终止消化；

步骤2：在室温下200g离心3-5分钟步骤1所得样品，弃去上清；

步骤3：对步骤2所得样品进行基因物质提取，并检测。

8.根据权利要求7所述细胞基因组稳定性检测方法，其特征在于，所述步骤3包括：

取TRNzol对细胞进行裂解，并抽提RNA，进行逆转录，采用qPCR检测炎症衰老相关基因的mRNA水平。

9.根据权利要求7所述细胞基因组稳定性检测方法，其特征在于，所述步骤2具体包括

在室温下200g离心3-5分钟步骤1所得样品，弃去上清；取PBS重悬细胞，取15,000-25,000个细胞，在室温下200g离心3分钟，弃去上清；用150-250μL 37℃预热的0.5％低熔点琼脂糖胶重悬细胞，每50-100μL悬液涂于一张1％常规熔点琼脂糖胶处理过的载玻片上，冰上凝固5-10分钟；对获取的样品进一步经8000J/m² UVC照射，再涂50-100μL37℃预热的0.5％低熔点琼脂糖胶于样品层上，冰上凝固5分钟，整个过程低温避光操作。

10.根据权利要求9所述细胞基因组稳定性检测方法，其特征在于，所述步骤3包括：

取裂解液进行细胞裂解，在4℃下处理过夜；样品转移至盛有足量碱性电泳液的电泳槽中，在4℃下浸泡30-60分钟，采用20V 4℃电泳30分钟；将获取的样品转移至4℃预冷的TBS中，中和5分钟，流水洗涤玻片10分钟；处理后的样品用70％乙醇脱水5-15分钟，在37℃下烘干琼脂糖胶层，在5μg/mL DAPI下于4℃避光染片20分钟，PBS洗1-5分钟后用抗荧光淬灭封片剂封片镜检测。