[发明专利]用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针、制备方法

权利要求书

1.一种用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针，其特征在于：所述糖类抗原为Gb3，该探针由以下两个部分偶联形成：

a、生物素化志贺毒素B亚基重组蛋白，

b、链霉亲和素标记量子点；

其中，所述生物素化志贺毒素B亚基重组蛋白由以下组分经体外酶法融合修饰获得：

c、志贺毒素B亚基重组蛋白，

d、生物素化短肽；

其中，所述志贺毒素B亚基重组蛋白由志贺毒素B亚基蛋白经羧基端修饰获得， 所述羧基端修饰为：在所述志贺毒素B亚基蛋白的羧基端修饰Myc标签、转肽酶A识别位点、His标签序列；

所述志贺毒素B亚基蛋白为志贺毒素1B亚基蛋白或志贺毒素2B亚基蛋白；

所述生物素化短肽为含有生物素基团的短肽，所述短肽的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；

所述体外酶法融合修饰的方法为，以包含Tris、NaCl、CaCl₂的pH7.5 PBS缓冲液为酶反应体系，在所述酶反应体系中加入志贺毒素B亚基重组蛋白、生物素短肽及转肽酶A，于4-25℃振荡反应1-5h获得所述生物素化志贺毒素B亚基重组蛋白；

所述志贺毒素2B亚基重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述志贺毒素1B亚基重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针，其特征在于：所述生物素化短肽包括短肽和至少一个生物素分子，所述短肽为含有甘氨酸标签的多肽，所述生物素分子为任意可结合链霉亲和素的生物素类似物。

3.根据权利要求1所述的用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针，其特征在于：所述酶反应体系中包含50 mM Tris、150 mM NaCl、5 mM CaCl₂的pH6.0-8.0 PBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针，其特征在于：在所述酶反应体系中加入所述志贺毒素B亚基重组蛋白的浓度为10-50 μM，所述生物素短肽的浓度为300-400 μM，所述转肽酶A的浓度为2-5 μM。

5.根据权利要求1所述的用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针，其特征在于：所述探针的制备方法为，生物素化志贺毒素B亚基重组蛋白、链霉亲和素标记量子点的偶联探针混合于pH6.0-8.0 PBS缓冲液中，4-25℃下避光，振荡反应30 min-2 h。

6.根据权利要求5所述的用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针，其特征在于：所述生物素化志贺毒素B亚基重组蛋白浓度为1 μM；所述链霉亲和素标记量子点的浓度为5-50 nM，振荡转速为10-200 rpm。

7.根据权利要求1-6任一所述的用于检测糖类抗原的基于志贺毒素B亚基重组蛋白的探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）志贺毒素B亚基重组蛋白的原核表达和纯化；

2）生物素短肽的制备；

3）所述志贺毒素B亚基重组蛋白与生物素化短肽的体外酶法融合修饰，得生物素化志贺毒素B亚基重组蛋白；

4）所述生物素化志贺毒素B亚基重组蛋白与链霉亲和素标记量子点进行偶联，制备得所述探针。