[发明专利]一种柯萨奇病毒A组19型VP1基因重组表达蛋白、多克隆抗体的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种柯萨奇病毒A组19型VP1基因重组表达蛋白、多克隆抗体的制备方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的技术方案要点为：一种柯萨奇病毒A组19型VP1基因，其碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示；一种柯萨奇病毒A组19型VP1基因重组表达蛋白，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；一种基于柯萨奇病毒A组19型VP1基因重组表达蛋白的多克隆抗体。本发明利用原核表达CV‑A19VP1基因重组蛋白制备免疫原，方法简便易行，具有生物安全性。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种柯萨奇病毒A组19型(coxsackievirus A19,CV-A19)VP1基因重组表达蛋白、多克隆抗体的制备方法及其应用。

背景技术

CV-A19属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)肠道病毒C组(Enterovirus C,EVC)^[1]。CV-A19的原型株为源于日本的NIH-8663(GenBank登录号为AF499641)，可以引起吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)^[1]。GBS，又称格林巴利综合征、急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病，通常发生在免疫反应产生抗体的传染病之后，抗体与神经膜上的神经节苷脂发生交叉反应，是一种潜在的威胁生命的感染后疾病，是急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)的常见病因，其特征是迅速进展，四肢对称性无力，在4周内达到最严重程度^[2]。目前已有研究报道表明，从呼吸道和胃肠道疾病^[3-5]、无菌性脑膜炎^[6]、AFP^[7]患者的标本和废水^[8]样本中可以检测到CV-A19。澳大利亚Isaacs等^[9]对收集自遗传风险病毒(Viruses in the Genetically at Risk,VIGR)前瞻性队列研究参与者的临床粪便样品进行近全长EV基因组的扩增与测序，亦扩增到CV-A19。本发明于2019年秋冬季从新乡市手足口病患儿的粪便中检测到一种肠道病毒，经过序列测定与分析发现，其VP1核苷酸序列与原型株8663(GenBank登录号为AF499641)的相似性为86.4％。该毒株与GenBank中已有的CV-A19毒株存在差异，其VP1核苷酸序列与Coxsackievirus A19 strain BBD26 polyprotein gene,complete cds(GenBank登录号为KC785531)相似性最高，为93.1％，其全长核苷酸序列与Coxsackievirus A19 strainBBD26polyprotein gene,complete cds(GenBank登录号为KC785531)相似性最高，为89.5％，而目前尚未见CV-A19检测与诊断的方法报道。

参考文献：

[1]Pallansch M A,Oberste M S,Whitton J L.Enteroviruses:Polioviruses,Coxsackieviruses,Echoviruses,and Newer Enteroviruses[M]//Knipe D M,Howley PM.Fields Virology.6th ed.Philadelohia:LIPPINCOTT WILLIAMSWILKINS,a WOLTERSKLUWER business.2013:510.

[2]van den Berg B,Walgaard C,Drenthen J,Fokke C,Jacobs B C,van DoornP A.Guillain-Barre syndrome:pathogenesis,diagnosis,treatment and prognosis[J].Nat Rev Neurol,2014,10(8):469-482.