[发明专利]草莓轻型黄边病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种草莓轻型黄边病毒胶体金免疫试纸条及其制备方法与应用。该试纸条包括底板和放置在其上的样品垫、包被胶体金标记抗体金标垫、含有检测线T和质控线C的检测垫和吸收垫；所述胶体金标记抗体为胶体金标记由草莓轻型黄边病毒制备的多抗；所述检测线T由草莓轻型黄边病毒制备的多抗形成；所述质控线C由鼠抗兔IgG或鼠抗兔IgG溶液形成。本发明还具体公开了该草莓轻型黄边病毒免疫胶体金快速检测试纸条的制备方法。本发明的草莓轻型黄边病毒免疫胶体金快速检测试纸条检测快速且特异性强，便于对草莓种苗、脱毒苗等进行快速检测。

技术领域

本发明属于胶体金免疫试纸条的制备技术领域，具体涉及一种草莓轻型黄边病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物,其产量在世界小浆果中居首位。无性繁殖的草莓植株一旦受到病毒侵染,病毒会随着无性繁殖材料传播扩散。经过几年的带毒栽培,引进品种的品质变劣、退化现象普遍发生,造成草莓严重减产,1年内可达30％-80％,且危害逐年递增。

草莓轻型黄边病毒是一种对草莓危害较严重的潜隐性病毒,也是危害我国草莓生产的4种主要病毒之一。单独侵染一般不表现明显症状,复合侵染能引起草莓植株叶片扭曲,叶脉皱缩，植株极度矮化,匍匐茎大量减少等,甚至造成部分草莓地块绝产绝收。SMYEV(也即草莓轻型黄边病病毒，Strawberry Mild Yellow Edge Virus)属花椰菜花叶病毒科花椰菜花叶病毒属病毒成员,目前,蚜虫是SMYEV唯一的自然传播介体,以半持久性方式传播。可以嫁接传播,种子和花粉不能传播。种苗带毒已是生产中病毒传播的主要因素和草莓生产的限制因素之一。

草莓种苗中病毒的快速准确检测是防治草莓病毒病的重要措施。目前的草莓病毒检测方法有利用病毒指示植物的“小叶嫁接法”，酶联免疫吸附法、聚合酶链式反应、实时荧光定量PCR法。但是这种方法周期长、灵敏度较低、费时费工、需要特殊的仪器。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种草莓轻型黄边病毒胶体金试纸条及其制备方法与应用。本发明根据感病的草莓轻型黄边病毒植株材料，提取蛋白粗提液进行免疫兔子制备抗血清，胶体碳吸附健康草莓叶片处理液，并与蛋白A亲和纯化获得草莓轻型黄边病毒的特异性抗体，再将该抗体表及胶体金后制备快速检测试纸条用于检测草莓轻型黄边病毒。

本发明提供的草莓轻型黄边病毒免疫胶体金快速检测试纸条，包括底板和放置在其上的样品垫、包被胶体金标记抗体金标垫、含有检测线T和质控线C的检测垫和吸收垫；

所述胶体金标记抗体为胶体金标记由草莓轻型黄边病毒制备的多抗；

所述检测线T由草莓轻型黄边病毒制备的多抗形成；

所述质控线C由鼠抗兔IgG或鼠抗兔IgG溶液形成。

上述草莓轻型黄边病毒免疫胶体金快速检测试纸条中，构成所述底板的材料为PVC板；

所述检测线和质控线之间的距离为5mm；

所述样品垫和所述包被胶体金标记抗体金标垫的叠压宽度为2mm；

所述包被胶体金标记抗体金标垫和所述检测垫的叠压宽度为2mm；

所述检测垫和所述吸收垫的叠压宽度为2mm。

所述胶体金标记抗体的包被浓度为10μg/ml；

所述检测线T的包被浓度为1.6mg/ml；

所述质控线C的包被浓度为1.0mg/ml。

上述草莓轻型黄边病毒免疫胶体金快速检测试纸条课按照下述方法制得：

1)制备草莓轻型黄边病毒的多抗，为将草莓轻型黄边病毒免疫动物，收集血清得到；

2)包被胶体金标记抗体金标垫的制备