[发明专利]肝素钠注射液中苯甲醇与苯甲醛的检测方法

说明书

本发明涉及一种肝素钠注射液中苯甲醇与苯甲醛的检测方法，其包括如下步骤：（1）配制苯甲醇标准溶液；（2）配制苯甲醛标准溶液；（3）将肝素钠注射液样品与乙腈按1:9混匀，置于冰浴中5min，离心取上清液，置于超滤离心管中以13400r/min转速离心20min，取滤出液，使用乙腈‑水溶液对肝素钠注射液样品进行10倍的稀释，得到样品的处理液；（4）对苯甲醇标准溶液、苯甲醛标准溶液以及样品的处理液分别进行HPLC检测。本发明的方法成本低廉、快捷简便，可满足实验室检测和企业产品质量控制的要求。

技术领域

本发明涉及一种肝素钠注射液中苯甲醇与苯甲醛的检测方法。

背景技术

肝素是从猪小肠粘膜中提取的一种多组分生化药物，是一种结构复杂的糖胺聚糖类药物，其注射液临床上主要用于防治血栓形成或栓塞性疾病（如心肌梗死、血栓性静脉炎、肺栓塞等）；各种原因引起的弥漫性血管内凝血（DIC）；也用于血液透析、体外循环、导管术、微血管手术等操作中及某些血液标本或器械的抗凝处理。

多剂量包装的肝素钠注射液中通常使用苯甲醇作为抑菌剂，因此要对苯甲醇及其降解产物苯甲醛进行控制。苯甲醛作为苯甲醇的降解产物为一种潜在的基因毒性物质，根据CPDB数据库中苯甲醛小鼠的TD50为1490 mg/kg/day，与《ICH M7 评估和控制药物中DNA反应性（致突变）杂质以限制潜在致癌风险》的规定，采用线性外推法计算可接受的摄入量（AI）。

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以肝素钠注射液日使用最大剂量70000 IU计算，注射液有效成分含量以5000IU/ml计算，苯甲醛安全限度为106μg/ml。安全阈值为31μg/ml。

目前，定量分析苯甲醇或苯甲醛的方法大多是通过气相色谱法、高效液相色谱法、表面增强拉曼散射光谱法、衰减全反射红外光谱法实现的，这些方法的直接应用均难以实现对于多组分多糖基质干扰下的苯甲醇与微量苯甲醛的同时定量分析。

气相色谱法采用直接样时，基质在进样口处受热随机脱落的小分子片段在色谱分析过程中对目标峰产生不确定的干扰，降低进样口将至能够保持基质稳定的温度后，苯甲醇与苯甲醛的重复性难以达到《中国药典2020版 9001分析方法验证指导原则的要求》。采用顶空进样时，受基质效应的影响，微量苯甲醛的回收率（准确度）无法达到《中国药典2020版 9001分析方法验证指导原则》的要求，而采用可以补偿基质效应的标准物质加入法则会大大增加操作复杂程度与检测时长，且因为苯甲醇对照品中都会含有少量的苯甲醛杂质，无法通过该法实现苯甲醇与苯甲醛的同时检测，进一步增加操作复杂程度与检测时长。

衰减全反射红外光谱法经试验同样存在因基质干扰无法准确定量的问题，且《中国药典2020版 0400光谱法》也对其进行了“ATR（衰减全反射红外光谱法）技术的灵敏度很高，但重现性较差，不是一个可靠的定量技术，除非每个待测成分都有合适的内标。”的描述。

应用高效液相色谱法时，由于多糖基质对色谱柱的影响，色谱系统会十分不稳定，从而无法满足《中国药典2020版 0512 高效液相色谱法》对系统实用性的要求与《中国药典2020版 9001分析方法验证指导原则》对重复性与准确度的要求，且无法通过加装保护柱来改善上述情况。

发明内容

本发明的目的是提供一种成本低廉、快捷简便的肝素钠注射液中苯甲醇与苯甲醛的检测方法。

本发明采用如下技术方案：

一种肝素钠注射液中苯甲醇与苯甲醛的检测方法，其包括如下步骤：

（1）配制苯甲醇标准溶液；

（2）配制苯甲醛标准溶液；

（3）样品的处理液；将肝素钠注射液样品与乙腈按1:9混匀，置于冰浴中5min，离心取上清液，置于超滤离心管中以13400r/min转速离心20min，取滤出液，使用乙腈-水溶液对肝素钠注射液样品进行10倍的稀释；