[发明专利]一种细胞固定剂、细胞固定方法和应用有效
申请号: | 202110331046.1 | 申请日: | 2021-03-27 |
公开(公告)号: | CN113063646B | 公开(公告)日: | 2022-06-21 |
发明(设计)人: | 施奇惠;王卓;王春英;张子缘 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | G01N1/30 | 分类号: | G01N1/30;G01N33/569;G01N33/58;C12Q1/6869 |
代理公司: | 北京维正专利代理有限公司 11508 | 代理人: | 肖照旭 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 细胞 固定 方法 应用 | ||
1.一种细胞固定剂,其特征在于,有效成分特异性针对蛋白上的特定有机基团通过形成共价键进行交联,其具有化学活性的两端中间含有一个间隔臂,间隔臂的长度不小于0.5纳米,间隔臂可被选择性的切断,有效成分为具有氨基反应活性的同型双功能交联剂和具有氨基反应活性和光活化叠氮苯化合物的异型双功能交联剂中的一种或多种的组合物,所述有效成分为3,3’-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)和3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯中的一种或两种的组合物。
2.根据权利要求1所述的细胞固定剂,其特征在于,有效成分特异性针对蛋白上的特定有机基团是氨基或疏基。
3.根据权利要求1所述的细胞固定剂,其特征在于,所述细胞固定剂是将3,3’-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)和3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯分别溶解于溶剂中,得到3,3’-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)溶液和3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液后再混合制成。
4.根据权利要求3所述的细胞固定剂,其特征在于,所述溶剂为无水二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的一种。
5.根据权利要求3所述的细胞固定剂,其特征在于,所述3,3’-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)溶液和3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液的浓度均为10-400mM。
6.一种采用权利要求1-5任一项所述细胞固定剂的细胞固定方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将所述细胞固定剂采用缓冲液稀释;
(2)将细胞样本加入稀释后的细胞固定剂中孵育。
7.根据权利要求6所述的细胞固定方法,其特征在于,步骤(2)中,细胞样本先重悬于缓冲液中得到细胞溶液,再将细胞溶液加入稀释后的细胞固定剂中孵育。
8.一种采用权利要求1-5任一项的所述细胞固定剂在免疫荧光技术中的应用。
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