[发明专利]一株非洲猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞及其应用

说明书

本发明公开了一株非洲猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞及其应用，该杂交瘤细胞株命名为小鼠SP2/0杂交瘤细胞，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2021年1月8日，保藏号为：CGMCC NO：21489。本发明成功制备并筛选出1株抗ASFV p72蛋白的单克隆抗体，用于建立了ASFV阻断ELISA抗体检测方法。该方法敏感性和特异性高，重复性好，具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于免疫学检测方法技术领域，具体公开一株非洲猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞及其应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)正严重危害我国养猪业发展。目前，国际上尚无安全有效疫苗。该病毒研究进展缓慢，临床上缺少有效的抗体检测试剂。本研究成功制备并筛选出1株抗ASFV p72蛋白的单克隆抗体，建立了一种阻断ELISA抗体检测方法，敏感性、特异性达到国际同类产品水平，具有重要应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一株非洲猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体。

本发明的另一目的在于提供一种非洲猪瘟病毒抗体检测阻断ELISA试剂盒。

本发明的又一目的在于提供上述非洲猪瘟病毒抗体检测阻断ELISA试剂盒的应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种分泌非洲猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株命名为小鼠SP2/0 杂交瘤细胞，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2021年1月8日，保藏号为：CGMCC NO：21489。

一种非洲猪瘟病毒单克隆抗体，由上述的杂交瘤细胞株分泌产生。

上述的非洲猪瘟病毒单克隆抗体在制备非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒中的应用。

上述的非洲猪瘟病毒单克隆抗体在非诊疗目的的阻断ELISA抗体检测非洲猪瘟病毒中的应用。

一种非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒，该试剂盒包括以重组ASFV p72蛋白作为抗原包被的ELISA板、ELISA标准阳性血清、ELISA阴性血清、辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体和TMB底物溶液，所述的单克隆抗体为权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

作为一种优选技术方案，该试剂盒还包括抗原稀释液、封闭液、样品稀释液和终止液；进一步优选的，所述的抗原稀释液为pH 9.6的碳酸盐缓冲液(称取0.17g无水Na₂CO₃、0.28g NaHCO₃于双蒸水中并定容至100mL)，封闭液为1％BSA，所述的样品稀释液为PBST，所述的终止液为2mol/L硫酸。

进一步优选的，所述的重组ASFV p72蛋白的制备方法为：参考GenBank数据库中ASFV Pig/HLJ/2018(GenBank MK333180)毒株的B646L(p72)基因序列设计特异性引物：：

P72-EcoR I-F：CCGGAATTCATGGCATCAGGAGGAG

P72-Xho I-R：CGCCTCGAGGAGCGCAAGAGGGGGC

扩增B646L基因1-329aa区域，将扩增得到的基因片段克隆至pET-28a(+)表达载体获得重组质粒pET-28a-His-p72t，将重组质粒转化至BL21(DE3)中进行诱导表达，收集沉淀进行纯化，得到纯化后的重组蛋白His-p72t。