[发明专利]一株非洲猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞及其应用

权利要求书

1.一种分泌非洲猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株命名为小鼠SP2/0杂交瘤细胞6E5-P72，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2021年1月8日，保藏号为：CGMCCNO：21489。

2.一种非洲猪瘟病毒单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌产生。

3.权利要求2所述的非洲猪瘟病毒单克隆抗体在制备非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒中的应用。

4. 一种非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以重组ASFV p72蛋白作为抗原包被的ELISA板、ELISA标准阳性血清、ELISA阴性血清、辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体和TMB底物溶液，所述的单克隆抗体为权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

5. 根据权利要求4所述的非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括抗原稀释液、封闭液、样品稀释液和终止液；所述的抗原稀释液为pH 9.6的碳酸盐缓冲液，封闭液为1% BSA，所述的样品稀释液为PBST，所述的终止液为2 mol/L 硫酸。

6. 根据权利要求4所述的非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的重组ASFV p72蛋白的制备方法为：参考 GenBank数据库中ASFV Pig/HLJ/2018毒株的B646L基因序列设计特异性引物：

P72-EcoR I-F：CCGGAATTCATGGCATCAGGAGGAG

P72-Xho I-R：CGCCTCGAGGAGCGCAAGAGGGGGC

扩增B646L基因1-329aa 区域，将扩增得到的基因片段克隆至pET-28a (+)表达载体获得重组质粒pET-28a-His-p72t，将重组质粒转化至BL21 (DE3)中进行诱导表达，收集沉淀进行纯化，得到纯化后的重组蛋白。