[发明专利]一种鲤浮肿病毒的原位杂交检测探针及其应用

权利要求书

1.鲤浮肿病毒的原位杂交检测探针，其特征在于，包含以下核苷酸序列的3条探针：

探针1：5’-GCCCAAGAGTTTTCTTCTCATCGTTTGTTACC-3’SEQ ID NO:1

探针2：5’-GCAACTCCTTGAGGAATATGATCTAGAATTCC-3’SEQ ID NO:2

探针3：5’-GAACATAACATTTGCAATTTTAACTTGCTCTGG-3’SEQ ID NO:3。

2.根据权利要求1所述鲤浮肿病毒的原位杂交检测探针，其特征在于，所述探针1、探针2、探针3在5’端修饰FAM。

3.含有权利要求1-2任一项所述鲤浮肿病毒的原位杂交检测探针的鲤浮肿病毒检测试剂盒。

4.根据权利要求3所述的鲤浮肿病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒为原位杂交检测试剂盒，含有权利要求1-2任一项所述原位杂交检测探针、蛋白酶K、预杂交液。

5.权利要求4所述鲤浮肿病毒检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)切片经热修复煮沸15分钟，滴加蛋白酶K室温消化20min，蒸馏水洗一次，PBS洗5min×3次；

(2)滴加预杂交液淹没，置于恒温42℃培养箱中2-3h；

(3)吸去多余液体后，滴加原位杂交检测探针混合液淹没切片，恒温37℃过夜；所述的原位杂交检测探针混合液，是将探针1、探针2、探针3溶解于可溶解的溶液中，探针1、探针2、探针3的摩尔比为1：1：1，且工作时三种探针的总浓度为1.0μg/ml；

(4)37℃条件下经梯度SSC洗涤即2×SSC洗涤10min，1×SSC洗涤10min×2次，0.5×SSC洗涤10min×1次；

(5)滴加DAPI避光孵育5min，进行染核，用PBS冲洗多余的DAPI；最后50％甘油封片，并在显微镜下拍照观察；

(6)结果判定：荧光激发后CEV感染部位呈绿色荧光，细胞核经DAPI染成蓝色荧光。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)对探针1、探针2、探针3可溶解的溶液选自预杂交液。