[发明专利]一种用于光热-免疫联合治疗的抗肿瘤自愈合水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种用于光热-免疫联合治疗的抗肿瘤自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1）、首先配制不同浓度的R837溶液，利用紫外分光光度计，测得不同浓度的R837溶液在波峰处的吸收强度，由此作出R837在波峰处吸收强度随浓度的变化曲线；

步骤（2）、制备MoS₂纳米片，其方法为：

在Schlenk 管中装入MoS₂ 粉末，将管密封后抽真空，再通入高纯Ar气体以确保管中没有O₂存在；抽取正丁基锂溶液，滴加入管中，之后将Schlenk管密封，放入超声清洗仪中超声；超声后静置分层，将上层的液体取出，在无氧无水的情况下，向管中加入除氧的超纯水10 mL，并在超声的条件下通过水与锂反应产生的氢气使MoS₂的片层相互剥离开来，获得悬浊液状的产物；将所得产物移入离心管中，加入等体积的无水乙醇，混合均匀后离心，去除上层清液，保留沉淀物，再通过无水乙醇清洗、离心；最后通过加入超纯水进行清洗并离心，得到的黑色沉淀用超纯水进行分散，即可得到MoS₂纳米片溶液；

步骤（3）、对MoS₂纳米片进行表面功能化：将DTT溶解于MoS₂纳米片溶液中，通入氮气进行除氧以防止在反应过程中DTT的硫醇基团被氧化，混合溶液在室温下持续搅拌24h；搅拌24h后，通过透析的方法除去过量的DTT，从而得到DTT修饰的MoS₂纳米片；

步骤（4）、首先称量PVA固体颗粒，加入到10mL的小烧瓶内，再加入MoS₂溶液以及R837溶液，并搅拌均匀；将烧瓶置于油浴锅中加热，每隔2-3分钟搅拌使其混合均匀并形成溶胶；油浴结束后，将溶胶取出并置于注射器内，通过注射器将溶胶均匀地挤入模具内，挤入过程中应保证内部没有气泡，将模具放入-20°C冰箱内，一定时间后将冷冻固化的凝胶取出，密封储存；

步骤（5）、将R837+MoS₂@PVA自愈合水凝胶置于5 mL离心管内并加入超纯水，在近红外光下照射，通过调节不同的光功率来实时监测不同功率下的光热效应，用热成像摄像机记录下温度随时间的变化；

步骤（6）、将不同药物含量的自愈合水凝胶置于孔板中，加入磷酸缓冲溶液，不同时间点取出溶液，测量溶液的吸收强度，定量溶液中的药物浓度；随后原孔中补充磷酸缓冲溶液，继续孵育；统计不同时间的药物释放量，绘制累积药物释放曲线；

步骤（7）、体外培养癌细胞，将其种在R837+MoS₂@PVA自愈合水凝胶上，MTT 法测量癌细胞的存活率随时间的变化，测量时每两天换一次新鲜的培养液；

步骤（8）从小鼠中提取树突状细胞（DC），利用24孔板Transwell进行DC成熟实验，流式检测DC细胞的成熟度；

步骤（9）构建小鼠肿瘤术后切除模型，局部植入该自愈合水凝胶，随后通过小动物生物发光成像监测肿瘤复发情况。

2.根据权利要求书1所述的用于光热-免疫联合治疗的抗肿瘤自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于：

所述步骤（1）中，R837溶液浓度范围为0.001~100μg/mL；

所述步骤（1）中，R837的波峰处于320nm。

3.根据权利要求书1所述的用于光热-免疫联合治疗的抗肿瘤自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于：

所述步骤（2）中，MoS₂粉末的质量为0.2g、正丁基锂溶液的体积为1mL；

所述步骤（2）中，Schlenk管放入超声清洗仪中的超声时间为1h；

所述步骤（2）中，清洗产物的离心条件时间为5min，转速为12000rpm。

4.根据权利要求书1所述的用于光热-免疫联合治疗的抗肿瘤自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于：

所述步骤（3）中，溶解于MoS₂纳米片溶液中的DTT质量为36mg，MoS₂纳米片溶液体积为10mL；

所述步骤（3）中，混合溶液在室温下持续搅拌时间为24h。