[发明专利]一种鹅星状病毒的灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种鹅星状病毒的灭活疫苗及其制备方法，以分离获得的一株毒力强、免疫性能好的鹅星状病毒N‑GoAstV‑190123株为抗原，将该毒株制备成灭活疫苗免疫后能够产生较高的中和抗体，对鹅群能够达到全部保护。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，主要涉及疫苗的生产，具体涉及一种鹅星状病毒灭活疫苗及其制备方法。

背景技术：

近年来，山东、江苏及安徽等地区养鹅场暴发了一种以痛风为主要症状的致死性传染病，已有数位学者报道了相关病例，经研究发现导致此次疫情发生的致病原为鹅星状病毒。特别是2017年以来，雏鹅痛风病迅速传遍全国，给我国的养鹅业带来了巨大的经济损失，严重威胁我国养鹅业的发展。鹅星状病毒是禽星状病毒属成员，属于 ＲNA 病毒，鹅感染星状病毒后表现为腹泻、关节炎及生长障碍，发生较重的致死性肝炎、胆囊炎及肾炎等疾病。2~25 日龄雏鹅发病率较高，15 日龄以内雏鹅最易感，死亡率一般为 15%~36%，最高可达 50%。由于禽星状病毒可拥有多个宿主，能够水平、垂直、跨种传播；同时禽星状病毒基因重组、适应新宿主的能力和新型禽星状病毒强毒株的不断发现，使得感染禽星状病毒的禽群净化异常困难。此外，禽星状病毒较强的理化因子抵抗力，对被禽星状病毒污染的环境消毒十分困难。目前，针对禽星状病毒还没有市场化的特异性药物和疫苗。体外适宜增殖细胞系的缺乏，导致可防控禽星状病毒感染的弱毒或灭活疫苗相对较少，更未有商品化的鹅星状病毒疫苗类产品。

现有技术中报道了多种疫苗的研发，例如荣雪路等研发和验证了鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗的免疫效果，研究结果表明鹅星状病毒重组 Capsid 蛋白亚单位疫苗免疫效果良好，能有效预防鹅星状病毒的感染；专利文献CN110699331A报道了一种鹅星状病毒弱毒的制备方法及应用，其采用采用高温处理和低温孵育相结合的方法致弱病毒，用于制备疫苗可有效的预防鹅星状病毒引起的鹅痛风病，然而，鹅星状病毒疫苗的研究仍然较少，基于目前鹅星状病毒在养殖场不断蔓延，导致的经济损失越来越大，因而，亟需研制安全有效的疫苗以及预防和治疗鹅星状病毒用的卵黄抗体和药物等，以对鹅星状病毒疫情进行有效的控制，避免养殖业的经济损失。

发明内容：

为了解决现有技术中鹅星状病毒感染的治疗手段有限，没有有效疫苗的技术问题，本发明旨在提供一种鹅星状病毒灭活疫苗及其制备方法，该疫苗能够刺激产生较高浓度的中和抗体，攻毒试验表明其能实现100%保护，免疫保护效力高。

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术手段：

一种鹅星状病毒灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗鹅星状病毒N-GoAstV-190123株经灭活后制备得到，其中所述鹅星状病毒N-GoAstV-190123株在中国典型培养物保藏中心CCTCC进行用于专利程序的培养物的保藏，其保存号为：CCTCC No：V202068，分类命名为鹅星状病毒 Goose astrovirus；保藏日期为2020年10月14日；保藏地址为：湖北省武汉市武汉大学保藏中心。

所述灭活疫苗还包括佐剂。

优选的，所述佐剂为Montanide ISA 206佐剂。

本发明还请求保护所述鹅星状病毒灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

步骤一，取鹅星状病毒N-GoAstV-190123毒种用稀释液稀释，稀释至ELD₅₀为5×10^5.00/mL，经绒毛尿囊膜途径接种8～10日龄SPF鹅胚，每胚0.2ml，接种后置37℃继续孵育，不必翻蛋；

步骤二，SPF鹅胚接种后，每日照蛋3次，将在24小时前死亡的鹅胚弃去，24小时以后死亡的鹅胚随时取出，至72小时，将活胚全部取出，气室向上直立，置于4℃冷却12小时；