[发明专利]一种鹅星状病毒的灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种鹅星状病毒灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗是由高致病性鹅星状病毒N-GoAstV-190123株经灭活后制备得到，其中所述鹅星状病毒N-GoAstV-190123株在中国典型培养物保藏中心CCTCC进行用于专利程序的培养物的保藏，其保存号为：CCTCC No：V202068，分类命名为鹅星状病毒 Goose astrovirus；保藏日期为2020年10月14日；保藏地址为：湖北省武汉市武汉大学保藏中心，所述鹅星状病毒N-GoAstV-190123株是从病死雏鹅中分离得到的。

2.根据权利要求1所述的鹅星状病毒灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗还包括佐剂，所述佐剂为Montanide ISA 206佐剂。

3.根据权利要求1所述的鹅星状病毒灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗是通过皮下注射进行免疫接种。

4.根据权利要求2所述的鹅星状病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一，取高致病性鹅星状病毒N-GoAstV-190123毒种用稀释液稀释，稀释至ELD₅₀为5×10^5.00/mL，经绒毛尿囊膜途径接种8～10日龄SPF鹅胚，每胚0.2mL，接种后置37℃继续孵育，不必翻蛋；步骤二，SPF鹅胚接种后，每日照蛋3次，将在24小时前死亡的鹅胚弃去，24小时以后死亡的鹅胚随时取出，至72小时，将活胚全部取出，气室向上直立，置于4℃冷却12小时；步骤三，将冷却12小时的鹅胚取出，表面消毒后，吸取鹅胚液，每20个鹅胚的胚液混合为一组，在收获胚液的同时，应逐个检查鹅胚，将胚液混浊不清、胎儿腐败及有任何污染可疑的鹅胚弃去不用；步骤四，收获后的胚液置于灭菌瓶中，通过离心机离心后，混合于一个储存罐内，在无菌条件下用灭菌的二级预过滤柱滤过，除去病毒液的残渣和其他杂质，同时取样测定毒价，并采用生理盐水稀释调整胚液的ELD₅₀为5×10^5.00；步骤六，准确量取甲醛，用注射用水配制成10%的甲醛溶液，混合均匀，然后往鹅胚液加入甲醛溶液，随加随搅拌，充分混合，甲醛最终浓度为0.2%，而后将其倒到已灭菌的灭活罐内，37℃灭活24小时，期间不停搅拌，灭活24小时后取样做无菌检验和灭活检验；步骤七，取灭活的病毒液加热至30℃保温，取等体积的Montanide ISA 206佐剂，倒入双层夹套容器并将温度保持在30℃，200r/min低速搅拌并逐渐将灭活病毒液加入，流速5L/min，待灭活病毒液全部加入后，提高搅拌速度至300r/min，30℃持续搅拌15分钟，而后在持续300r/min高速搅拌的情况下冷却至10℃以下，停止搅拌，将乳液在10℃以下静置24小时，分装并加盖密封，4℃左右保存备用，制得鹅星状病毒灭活疫苗。