[发明专利]一种特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法有效
| 申请号： | 202110301266.X | 申请日： | 2021-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN113087788B | 公开（公告）日： | 2022-03-08 |
| 发明（设计）人： | 李永波;楚秀生;崔德周;樊庆琦;隋新霞;黄琛 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院作物研究所 |
| 主分类号： | C07K16/06 | 分类号： | C07K16/06;C07K16/16 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 赵斌;苗峻 |
| 地址： | 250100 山东省济南*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 特异性 识别 小麦 源自 相关 蛋白 克隆 抗体 制备 方法 | ||
1.一种特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所采用的抗原为人工合成多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码该多肽的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.根据权利要求1所述特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：
（1）将5 mg人工合成多肽偶联到1 mg血蓝蛋白KLH；
（2）饲养实验级日本大耳白兔和新西兰大白兔各1只，待兔子长至1-2kg时，用注射器将充分混匀的1mL完全弗氏佐剂和1mL浓度为0.7 mg/mL的步骤（1）偶联后的多肽在每只兔子皮下注射第1针，标记为第1天；
（3）第12天，将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂和1mL浓度为0.35 mg/mL的步骤（1）偶联后的多肽在兔子皮下注射第2针；
（4）第26天，将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂和1mL浓度为0.35mg/mL的步骤（1）偶联后的多肽在兔子肌肉注射第3针；
（5）第40天，将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂和1mL浓度为0.35 mg/mL的步骤（1）偶联后的多肽在兔子肌肉注射第4针；
（6）第54天，将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂和1mL浓度为0.35 mg/mL的步骤（1）偶联后的多肽在兔子肌肉注射第5针；
（7）第66天，取兔子血清进行Western blot验证。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的完全弗氏佐剂为液体石蜡：羊毛脂的体积比为2:1的组合物。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的不完全弗氏佐剂为含有20mg/mL卡介苗的完全弗氏佐剂。
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