[发明专利]一种多菌灵半抗原、人工抗原及其免疫荧光层析检测卡

说明书

本发明公开了一种多菌灵半抗原、人工抗原及其免疫荧光层析检测卡与检测方法，其结构式为：，该半抗原不仅具有活性基团，同时在一个半抗原分子结构中还具有两个多菌灵分子的特征结构，突出半抗原在载体蛋白上的空间位置和抗原决定簇，有效的增强了识别位点，提高了小分子半抗原的免疫原性；且使用半抗原制得的人工抗原及单克隆抗体，可快速、便捷地实现多菌灵的定量检测，本发明属于免疫化学技术领域。

技术领域

本发明属于免疫化学技术领域，具体涉及一种多菌灵半抗原、人工抗原及其免疫荧光层析检测卡。

背景技术

多菌灵又名棉萎灵或苯并咪唑44号，是一种良好的广谱、高效、内吸性杀菌剂，对子囊菌、担子菌以及半知菌类中的大多数病原菌都有效，广泛应用于农作物、中草药、烟草等的病害防治工作中。多菌灵化学性质稳定，能被植物的种子、根和叶吸收，残效期较长，对人、畜等有一定的毒性。多菌灵化学结构式如下：

目前，国内外对多菌灵残留的检测方法主要有高效液相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法。仪器方法具备检测灵敏度高、特异性强等优势，但是检测样本前处理繁琐、耗时，样品还需提取和净化处理，同时仪器检测方法需要昂贵的大型仪器和设备，配备专业的检测技术人员进行操作和管理，无法进行现场大规模检测，时效性差，难以推广。

免疫层析技术是一种将免疫检测技术、色谱层析技术和免疫标记技术相结合的固相膜免疫分析方法。这种技术，通常借助选用不同的生物标记物获取不同强度的测量信号来进行结果分析。纳米粒子一般是颗粒尺寸在100-500nm范围的超微粒子。与其他粒子相比，纳米粒子具有大的表面积、其光、热、磁敏感特性和表面的稳定性较高。同时纳米材料用于生物分析，可以大大改善标记物的性能，显著提升现有分析方法的灵敏度和特异性，其在抗原抗体的标记上具有很大的应用潜能。然而得到高亲和力高特异性的单克隆抗体是免疫检测的前提，其中人工抗原的合成是其中重要的一步。

由于多菌灵是小分子物质（分子量MW1000Dal），本身不具有诱导机体产生抗体的能力，需要和蛋白载体偶联后，才能具有免疫原性。但多菌灵结构中没有可以直接利用的活性基团如-COOH、-NH₂、-OH或-SH₂等，因此，要实现多菌灵和载体蛋白的偶联，首先要进行多菌灵半抗原的设计和合成。

发明内容

针对上述问题，本发明的第一个目的是提供具有两个多菌灵分子的特征结构，使得半抗原在载体蛋白上的空间位置更加突出，有效的增强了识别位点，提高了小分子半抗原的免疫原性和免疫反应性。

本发明的第二个目的是提供一种用于免疫荧光层析技术的多菌灵人工抗原及其抗体。

本发明的第三个目的是提供灵敏度高，可快速、便捷地实现多菌灵检测的免疫荧光层析检测卡。

本发明的第四个目的是提供多菌灵定量检测试剂卡的检测方法。

为解决上述技术问题为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：

一种多菌灵半抗原，多菌灵半抗原的结构式为：

式Ⅳ。

上述的多菌灵半抗原的制备方法，所述的多菌灵半抗原通过下述步骤制得的：

1）将化合物Ⅰ与化合物Ⅱ按照摩尔比（2~2.5）:1溶于甲苯/水的混合溶液中，采用酸性物质调节pH3~4，60~70℃反应6 h以上，获得化合物Ⅲ；

2）将化合物Ⅲ溶于甲醇中，加入丁二酸酐，所述的丁二酸酐与式Ⅲ所示的化合物的摩尔比为（2~3）：1；在40~50℃反应12 h以上，获得多菌灵半抗原化合物Ⅳ；

所述的式Ⅰ~Ⅳ如下：

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