[发明专利]一种多重标志物液态芯片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种多重标志物液态芯片及其制备方法，所述液态芯片包括一抗‑微球复合物和二抗‑生物素复合物。所述液态芯片的制备方法包括一抗、二抗的脱盐处理、微球的活化、活化微球与脱盐一抗的交联以及生物素与脱盐二抗的交联四个部分。其中，对于涉及微球的操作步骤种增加了表面活性剂处理，以获得分散均匀的微球。本发明提供的液态芯片微球具有较高的分散度，不易聚集黏结，提高了所述液态芯的检测准确度。

技术领域

本发明涉及生物与新医药技术领域，具体涉及一种多重标志物液态芯片、一种多重标志物液态芯片的制备方法。

背景技术

液态芯片技术也称为悬浮式点阵技术，主要是以美国Luminex公司开发的液态芯片为首，它结合了编码微球、激光技术、应用流体学、最新的高速数字信号处理器和计算机运算法则，具有高通量、高速度、低成本、高灵敏度、高精密度、线性范围广、操作简便等优势，在免疫分析、核酸分析、酶学分析、受体和配体识别等分析中有广泛应用。

液态芯片（Luminex xMap）技术的实现原理是通过把聚苯乙烯微球用荧光染色编码，通过调节两种不同荧光染料的配比来获得高达100多种具有不同荧光特征的荧光光谱微球矩阵，每种微球可以共价交联上特定检测物，在检测时，带有不同特异性检测物的编码微球混合，对微量样本检测，在悬液中靶物质特异性结合后，用特定的流式荧光仪器进行检测，可获得多重检测物质的含量结果。

现有技术中，微球之间非常容易黏结，比如常用的聚苯乙烯微球，因为其粒径小、比表面积大、吸附性强、易于改性和修饰等特点，能够应用于流式荧光法，但是因为聚苯乙烯微球具有很强的吸附性，容易形成大颗粒团，同时也会降低标记在微球上的靶物质含量。

微球功能基团的活化通常需要使用NHS和EDC等酯缩反应试剂，由于基团活化本身就是一个不稳定的过程，各种化学势能都有增加，环境的pH值、盐浓度都会降低活化基团后续的反应活性，此时微球功能基团的均一性会存在不稳定性。

发明内容

针对上述问题，本发明提出一种一抗-微球复合物的制备方法，包括以下步骤：

S10：对一抗进行脱盐处理，得到脱盐一抗；

S20：对微球进行活化操作，得到活化微球；在所述活化操作的过程中，使用含有表面活性剂的缓冲溶液对所述微球进行梯度清洗；

S30：将所述脱盐一抗与所述活化微球混合，并且震荡避温包被得到包被好的复合物，使用TBST磁珠保存液对所述包被好的复合物进行清洗，得到所述一抗-微球复合物。

进一步地，步骤S10中所述对一抗进行脱盐处理，具体包括以下步骤：

S11：使用PBS缓冲溶液对脱盐柱进行清洗；

S12：在所述脱盐柱中加入所述一抗，离心处理得到所述脱盐一抗。

进一步地，所述离心处理为：在1500g的条件下离心1-2min。

进一步地，步骤S20中所述对微球进行活化操作包括以下步骤：

S21：使用MES缓冲液对所述微球进行梯度清洗，得到清洗后的微球；

S22：将NHS和EDC与所述清洗后的微球充分混合，得到待清洗的活化微球；

S23：使用连接缓冲液对所述待清洗的活化微球进行清洗操作，得到所述活化微球。

进一步地，所述微球与NHS和EDC混合的质量比为2000:(18-22):(9-11)。

进一步地，所述MES缓冲液和/或所述连接缓冲液中含有质量浓度为2-5%的表面活性剂。

进一步地，所述微球标记有磁性，更进一步地，所述微球含有荧光标记。

进一步地，所述步骤S30具体包括以下步骤：