[发明专利]一种高效二联检测口蹄疫和小反刍兽疫的引物以及试剂盒

说明书

本发明公开高效二联检测口蹄疫和小反刍兽疫的引物以及试剂盒，本发明以改良后的LAMP技术为基因扩增反应原理，在反应体系里加入金纳米颗粒，吸附ssDNA和蛋白酶，抑制升温过程中的非特异性反应，达到热启动的目的，避免在升温过程中的非特异性反应；结合改良后的LAMP技术与微流控芯片技术，既可以快速、准确的检测区分口蹄疫与小反刍兽疫，同时，反应试剂预埋于微流控芯片上，实现一样双指标检测，又使用户操作简便。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种高效二联检测口蹄疫和小反刍兽疫的引物以及试剂盒。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)，俗名“口疮”、“辟癀”，是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。主要侵害偶蹄兽，偶见于人和其他动物。症状主要是二至三天后快速下降的高烧；口中的水疱导致粘性或泡沫状唾液的过度分泌并流淌出口外；足部的水泡有可能破裂并导致残废。成年动物感染后可能会伴有数月无法恢复的体重减轻，以及成年雄性动物的睾丸肿胀，对于母牛，牛奶产量会明显减少。虽然大部分动物得病后可自行恢复，但该疾病严重时亦可能导致心肌炎或死亡。

小反刍兽疫(peste des petits ruminants，PPR)俗称羊瘟，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病。感染动物临诊症状与牛瘟病牛相似。急性型体温可上升至41℃，并持续3～5天。感染动物烦躁不安，背毛无光，口鼻干燥，食欲减退。流黏液脓性鼻漏，呼出恶臭气体。在发热的前4天，口腔黏膜充血，颊黏膜进行性广泛性损害、导致多涎，随后出现坏死性病灶，开始口腔黏膜出现小的粗糙的红色浅表坏死病灶，以后变成粉红色，感染部位包括下唇、下齿龈等处。严重病例可见坏死病灶波及齿垫、腭、颊部及其乳头、舌头等处。后期出现带血水样腹泻，严重脱水，消瘦，随之体温下降。出现咳嗽、呼吸异常。发病率高达100％，在严重暴发时，死亡率为100％。

目前的对上述两种疾病的诊断方法是RT-PCR法。采用现有的PCR技术，由于其反应要在2个不同的温度区循环，对仪器要求高，成本也相对高昂，并且PCR技术仅仅1对扩增引物，易受干扰，特异性相对不足，且出结果时间较久，操作专业要求高，微量加量步骤多。而LAMP技术共有4条不同的特异性引物，故而检测结果准确度更高，但是由于是恒温反应，缺少类似PCR的热启动酶，在设备升温阶段容易产生非特异性扩增从而影响检测结果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的缺陷提供一种高效二联检测口蹄疫和小反刍兽疫的引物及试剂盒。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种高效二联检测口蹄疫和小反刍兽疫的引物，具体为：

FMDV-F3：AGGTTTCCACAACTGACACA；

FMDV-B3：GTTAGGACGTGGCTTTCGG；

FMDV-FIP：CGAGCGTGGAGTCAAACACAGT-GTGCAATTTGAAACTCCGCC；

FMDV-BIP：AGCGAGTGCTAGTAGCAGCAC-CGGGTCCTTGTCACCAAG。

PPRV-F3：GGTCTCCTTCCTCCAGCA；

PPRV-B3：GCCTCACGAGGGTTTTGAC；

PPRV-FIP：TCCCTTCCTTCGGACCCATTTG-GGAGAGTCGCCTACACCA；PPRV-BIP：AACACGCTCAGGAAAGCCCAG-TCTCGCGAGAGTTCATCCTC。

本发明还提供一种高效二联检测口蹄疫和小反刍兽疫的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物以及反应液，所述反应液的组成为：