[发明专利]抗人CD40抗体及其用途

说明书

本申请公开了结合人CD40的抗体，编码所述抗体的核酸分子、包含所述核酸分子的载体、包含所述核酸分子或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体的应用。

技术领域

本申请大体涉及基因工程和抗体药物领域；具体而言，涉及抗人CD40抗体领域及其用途。本申请开发了新的抗人CD40抗体，并提供了所述抗体在预防或治疗CD40介导的疾病中的用途。

背景技术

CD40是分子量为50KDa的I型跨膜蛋白，是肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的成员¹，主要在B细胞和其他抗原递呈细胞(APC)(如树突状细胞和巨噬细胞)上表达。CD40也可以由内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞和上皮细胞表达，在细胞免疫反应和体液免疫反应中具有不可替代的作用。CD40的配体CD40L(又称为CD154、gp39或TRAP)是一种II型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员，CD40L主要表达于激活的CD4⁺T细胞及一小亚群CD8⁺T细胞表面²。

CD40和CD40L的相互作用是T细胞激活的共刺激信号。T细胞完全激活需要两个不同但协同的信号。由抗原递呈细胞(APC)上的抗原-MHC复合物提供的第一信号，通过T细胞抗原受体(TCR)传递，并负责免疫应答的特异性。第二或共刺激信号则是通过CD28与B7-1(CD80)/B7-2(CD86)，以及CD40与CD40L相互作用来传递，这是达到完全T细胞应答所必需的。在缺乏共刺激信号时，T细胞可能发生无应答或持续特异性免疫应答，从而产生耐受。因此第二信号通路在机体免疫应答的整个过程中起着非常关键的调节作用。

静息B细胞上的CD40-CD40L相互作用能诱导B细胞增殖、分化为抗体分泌细胞及同种型转换，并且对生发中心的发展和记忆性B细胞的存活都有影响，所有这一切都是体液免疫应答必不可少的³。树突状细胞(DC)上CD40与CD40L的结合可诱导DC完全成熟为有效APC，这表现在共刺激分子(如B7家族(CD80、CD86))的表达增加，以及促炎细胞因子(如白细胞介素12)的产生，这将导致显著的T细胞应答^4,5。

CD40信号由多聚化受体经一系列TNF受体相关因子(TRAF)的募集而转导⁶。CD40信号转导激活多种通路，包括NF-κB(核因子-κB)、MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)和STAT3(信号转导子和转录激活子-3)⁷，其通过激活活化蛋白、c-Jun、ATF2(激活转录因子-2)和Rel转录因子⁸调节基因表达。通过CD40信号应答而激活的基因包括各种细胞因子和趋化因子，如IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α和巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP1α)。在某些细胞类型中，CD40激活可能会导致产生细胞毒性自由基、COX-2(环氧合酶-2)，并产生NO(一氧化氮)⁸。

CD40不仅在正常的免疫细胞上表达，还可以在许多恶性细胞上表达。例如，CD40在以下疾病中过表达:B系非霍奇金淋巴瘤(NHL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、霍奇金病^9,10、多发性骨髓瘤¹¹以及膀胱癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、恶性黑色素瘤¹²,13^,14等。

目前已知CD40的激活可有效触发抗肿瘤反应，包括肿瘤特异性T细胞反应的免疫激活、对CD40阳性肿瘤直接的细胞凋亡作用，以及刺激导致ADCC的体液反应，且观察到的肿瘤根除与肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的出现强烈相关^15,16。据报道，CD40激动剂能克服荷瘤小鼠的T细胞耐受，激起针对肿瘤相关抗原的有效的细胞毒T细胞应答，并增强抗肿瘤疫苗的效力^17,18。

因此，鉴于抗CD40抗体具有广泛的适用性，基于临床需求，探索和研发CD40靶向抗体具有重要的生物学和医学意义。