[发明专利]强直性脊柱炎易感基因的早筛方法及试剂盒

说明书

本发明提供了强直性脊柱炎易感基因的早筛方法及试剂盒，具体的本发明考虑了中国人群与欧美人群人群基因谱的差异性，筛选出与中国人强直性脊柱炎易感相关基因的SNP位点的组合，利用核酸质谱仪对强直性脊柱炎相关的遗传学标识进行广泛(高通量检测位点、高通量检测样本)筛查和检验。通过本发明的方法检出成功率高、技术重现性好、性价比高，可实现单个小样本多基因的检测，满足小样本最大化使用；本发明的方法具有高准确性、高灵敏性的技术优势，检测结果稳定，提高了检测阳性率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种用于强直性脊柱炎易感基因的早筛方法及试剂盒。

背景技术

强直性脊柱炎(AS)是以骶髂关节和脊柱附着点炎症为主要症状的疾病。强直性脊柱炎患者发病5年后，约有4％患者丧失部分劳动能力，而发病45年后约达50％患者丧失劳动能力。遗传因素在AS的发病中具有重要作用。国外报道强直性脊柱炎的发病率在一般人群中为0.1％，而在强直性脊柱炎患者的亲属中患病率高达4.0％，比一般人群高40倍。AS是一个具有复杂遗传背景的多基因病，因此需要我们从基因，转录以及蛋白翻译等不伺水平进行多层次的立体研究，以更加全面地认识该疾病的病因基础，发病风险及进展等机制，以期在临床上能够早发现早治疗。

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNPs)是一种遗传标记，是指基因组水平上由于单核苷酸的变异，而引起的DNA序列的多态性。在人群中的发生频率大于1％，包括单碱基的转换、颠倒以及单碱基的插入或缺失等形式表现，是一种新的遗传标志，可以为疾病的预测、诊断、治疗以及新型药物的研制提供可靠的有效的科学根据。

SNP在疾病基因定位中所发挥的作用主要包括：1.在疾病定位区域中寻找致病SNP，这种SNP的出现可能直接导致了基因转录水平上和翻译水平上的变化，即改变了基因表达量或者基因产物蛋白质的组成结构，从而导致某种疾病发生或使得个体对某种特殊的环境易感；2.SNP作为一个遗传标记，与疾病或表型紧密连锁。近年来利用SNP预测疾病的发生发展已经成为临床和科研工作者的热点，且在肿瘤和心脑血管等重大疾病预测上的应用价值已初见端倪。

强直性脊柱炎的早期诊断仍面临挑战：一是诊断延迟现象普遍。国际上统计，强直性脊柱炎患者首次出现症状到确诊，平均诊断延迟的时间是9年；二是核磁共振技术的引入有助于早期诊断避免患者脊柱发展到强直，但也有患者被误诊为强直性脊柱炎。目前已有大量研究证实SNP位点检测可用于AS易感的判断及早期诊断，如GPR65基因的rs11624293多态性与中国汉族人群AS的易感性和严重程度有关，USP34中的rs14170和rs2123111以及C2orf74中的rs1729674可能与汉族人群的AS易感性有关，等等。因此确定AS患者较高发风险的一些预测因素非常重要，这可能有助于在NAFLD诊断时针对给定患者采用适当的治疗方法。目前临床尚未有十分有效的早期检查方法，因此亟需建立一种高灵敏，经济，简单的分子技术筛查方法，推动强直性脊柱炎早期筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种强直性脊柱炎易感基因的早筛方法及试剂盒。

本发明的第一方面，提供了一种强直性脊柱炎易感基因的早筛试剂盒，所述试剂盒包括PCR扩增引物对组，所述PCR扩增引物对组包括特异性扩增选自下组的SNP位点的引物对：rs3091244、rs10865331、rs11624293、rs4937362、rs2275913、rs6693831、rs1884444、rs14170、rs2123111、rs1729674、rs2910164、rs3746444、rs7574865和rs2302589。

在另一优选例中，所述试剂盒基于多重PCR飞行时间质谱检测强直性脊柱炎易感基因SNP基因突变位点。

在另一优选例中，所述试剂盒还包括单碱基延伸引物组。

在另一优选例中，所述PCR扩增引物对组中，特异性扩增rs3091244的引物对如SEQID NO.1至SEQ ID NO.2所示。