[发明专利]一种假病毒的纯化试剂及纯化方法

说明书

本发明属于假病毒纯化技术领域，具体涉及一种假病毒的纯化试剂及纯化方法。所述假病毒的纯化试剂，包括以下组分：裂解液、醇洗液、脱盐液、洗脱液；其中，所述醇洗液的组分为：乙醇、醋酸钠、枸橼酸三钠、柠檬酸二钠、三羟戊二酸钠；所述脱盐液的组分为：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris‑HCl)、2‑环己胺基乙磺酸、盐酸赖氨酸。本发明提供的一种假病毒的纯化试剂及纯化方法，能够快速完成假病毒的纯化，纯化方法操作简单、成本低、纯化效率高，扩增的荧光曲线良好。

技术领域

本发明属于假病毒纯化技术领域，具体涉及一种假病毒的纯化试剂及纯化方法。

背景技术

假病毒是指一种反转录病毒能够整合另外一种不同种类病毒的囊膜糖蛋白，从而形成的具有外源性病毒的囊膜，而基因组保持着反转录病毒本身基因组特性的病毒假病毒科(Pseudoviridae)，又译作伪病毒科，是一种逆转录病毒，形态为单链RNA，该类病毒主要感染真菌和无脊椎动物。

假病毒(pseudovirus)又称“伪病毒”，是一类嵌合型病毒颗粒，是在一种复制缺陷型病毒(病毒载体)的表面上表达另一种病毒的重组糖蛋白的嵌合病毒颗粒。

因为真病毒对实验室环境要求高且获取难度高，对实验操作人员也有着极高要求，因此在病毒研究过程，假病毒就十分重要，因安全性、易检测性、靶标明确性、易引入突变等特点，假病毒作为基础研究样本，能够极大地缩短实验周期，并降低实验难度。

在假病毒颗粒制备技术中，目前存在的最大问题是纯化问题以及含有假病毒颗粒溶液的纯度问题。在假病毒的使用过程，假病毒作为模拟样本，同样需要经过纯化验证，但是常规的病毒提取试剂盒实验周期较长且需要高速离心，难以满足实验的快速简便。

传统方法一般是将含有外源基因的重组体成功构建后进行诱导表达，然后破碎细胞，双酶(DNaseI和RNase A)消化，再按照噬菌体纯化方法进行纯化，盐沉淀，梯度离心回收假病毒颗粒。这种方法操作繁琐，对设备要求高，多数需要高速离心，更关键的是梯度离心回收的含有假病毒颗粒的溶液中仍然存在一定量的核酸，并且残余核酸在PCR鉴定含有假病毒颗粒溶液的纯度过程中很容易使PCR产生假阳性，更进一步影响到假病毒颗粒定量的研究。虽然有些研究人员在纯化的含有假病毒颗粒溶液提取RNA后，再进行DNase I酶消化，以去除残存核酸干扰，但这样会造成制备的RNA损失很大，同样造成下一步定量不精确。

因此，有必要研究一种假病毒的纯化方法，以满足假病毒的快速纯化的要求。

发明内容

为克服以上技术问题，本发明提供了一种假病毒的纯化试剂及纯化方法，能够快速完成假病毒的纯化，纯化方法操作简单、成本低、纯化效率高，扩增的荧光曲线良好。

为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：

一种假病毒的纯化试剂，包括以下组分：裂解液、醇洗液、脱盐液、洗脱液；

其中，所述醇洗液的组分为：乙醇、醋酸钠、枸橼酸三钠、柠檬酸二钠、三羟戊二酸钠；

所述脱盐液的组分为：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)、2-环己胺基乙磺酸、盐酸赖氨酸。

优选地，所述裂解液的组分为：盐酸胍(GuHCl)、醋酸钠(NaAc)、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)。

优选地，所述洗脱液的组分为：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)、EDTA·2Na。

优选地，所述裂解液中各组分浓度为：3-6M GuHCl、0.1-0.5M NaAc、1-2％(质量浓度)Triton X-100。

优选地，所述醇洗液中，乙醇的体积分数为50-70％；醋酸钠的浓度为0.1-0.2M；枸橼酸三钠的浓度为5-15mM、柠檬酸二钠的浓度为5-10mM、三羟戊二酸钠的浓度为1-5mM；