[发明专利]一种假病毒的纯化试剂及纯化方法有效
申请号: | 202110265212.2 | 申请日: | 2021-03-11 |
公开(公告)号: | CN113025585B | 公开(公告)日: | 2021-09-28 |
发明(设计)人: | 张瑜;蔡亦梅;李亚楠;张泽云;高静;金鑫浩;贾欣月;任鲁风 | 申请(专利权)人: | 北京中科生仪科技有限公司 |
主分类号: | C12N7/02 | 分类号: | C12N7/02 |
代理公司: | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人: | 宋秀兰 |
地址: | 100176 北京市大兴区北京经*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 病毒 纯化 试剂 方法 | ||
1.一种假病毒的纯化试剂,包括以下组分:裂解液、醇洗液、脱盐液、洗脱液;
其中,所述醇洗液组成及各组分浓度为:乙醇的体积分数为50-70%、0.1-0.2M醋酸钠、5-15mM枸橼酸三钠、5-10mM柠檬酸二钠、1-5mM三羟戊二酸钠;
所述脱盐液组成及各组分浓度为:5-10mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、5-10mM 2-环己胺基乙磺酸、1-5mM盐酸赖氨酸;
所述裂解液的组成组分为:盐酸胍、醋酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚;
所述洗脱液的组成组分为:三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、EDTA·2Na。
2.如权利要求1所述的假病毒的纯化试剂,其特征在于,所述裂解液中各组分浓度为:3-6M盐酸胍、0.1-0.5M醋酸钠、1-2%聚乙二醇辛基苯基醚。
3.如权利要求1所述的假病毒的纯化试剂,其特征在于,所述枸橼酸、柠檬酸二钠和羟戊二酸钠的浓度比为1-3:1-2:1;所述枸橼酸、柠檬酸二钠和羟戊二酸钠的总浓度为15-26mM。
4.如权利要求1所述的假病毒的纯化试剂,其特征在于,所述洗脱液中各组分的浓度为:5-10mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、1-3mM EDTA·2Na。
5.一种假病毒的纯化方法,其特征在于,使用权利要求1-4任一所述的假病毒纯化试剂对假病毒进行纯化,包括以下步骤:
(1)取磁珠振荡混匀后,放入EP管中;
(2)加入裂解液和假病毒,涡旋震荡混匀,静置;
(3)使用磁力架吸附溶液澄清,吸出废液弃掉;
(4)向EP管中加入醇洗液,震荡混匀,使用磁铁吸附磁珠,弃掉上清液;
(5)保持磁铁吸附,沿管内侧壁转圈加入脱盐液,静置,弃掉上清液;
(6)加入洗脱液,水浴,再次震荡混匀;
(7)用磁铁吸附住磁珠,将产物冰浴或4℃保存或进行后续PCR验证。
6.如权利要求5所述的假病毒的纯化方法,其特征在于,步骤(2)中,所述静置的时间为30-60s;步骤(5)中,所述静置的时间为2-10s;步骤(6)中,所述水浴的温度为50-70℃;所述水浴的时间为1-5min。
7.如权利要求1-4任一所述的假病毒的纯化试剂在制备微流控芯片中的应用。
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