[发明专利]一种利用分光光度法测定多酚化合物与金属离子络合反应化学计量比的方法

说明书

一种利用分光光度法测定多酚化合物与金属离子络合反应化学计量比的方法。步骤为：(1)分别配置等摩尔浓度的多酚溶液和金属离子溶液及反应缓冲液；(2)分别向1mL比色皿中加入0‑20μL金属离子溶液及20‑0μL多酚溶液，使得每次加入的金属离子溶液和多酚溶液总体积保持为20μL不变，然后补加反应缓冲液至1mL，充分混合，放置1‑2min；(3)每次混合后，用分光光度计测定反应溶液在330nm下的吸光度值；(4)收集每次测定的吸光度值，利用MatLab软件进行四项式曲线模拟，得到曲线最高点对应的X值，即为络合物的化学计量比。本发明技术操作简单、便捷、对仪器设备要求低、稳定性好。

技术领域

本发明涉及一种利用分光光度法测定多酚化合物与金属离子络合反应化学计量比的方法，属于化学分析技术领域。

背景技术

络合沉淀金属离子是多酚化合物的重要特性之一。许多金属离子在有机体内具有重要的生理作用，多酚化合物通过与这些金属离子形成结构紧密的络合物从而影响它们的生物活性。多酚化合物络合金属离子能力来源于多酚化合物中的邻苯二酚和棓酰基结构。

在金属离子存在的条件下，酚羟基首先发生去质子化，然后与金属离子以共价键形式进行配位反应，形成多酚-金属离子络合物。

本发明技术利用等摩尔连续变化法测定多酚-金属离子络合反应的络合物化学计量比。该方法配制的一系列溶液中，金属离子浓度[M]及配位体浓度[L]同时变化，但两者总和(C)不变，即：[M]+[L]＝C(其中[L]＝CX，[M]＝C(1-X)，X＝[L]/C，X为摩尔分数，C为常数，即两者浓度总和)。改变混合物中多酚化合物配体与金属离子的浓度(保持混合物中多酚化合物配体和金属离子的总浓度不变)，混合溶液的紫外吸光度值也随之改变。当混合物中配体与金属离子摩尔浓度达到络合物化学计量比时混合物在特征吸收波长下具有最大吸光度值。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用分光光度法测定多酚化合物与金属离子络合反应化学计量比的方法。

本发明的技术方案为：一种利用分光光度法测定多酚化合物与金属离子络合反应化学计量比的方法，具体通过以下步骤制备得到：

(1)分别配置1-10mM等摩尔浓度的多酚溶液和金属离子溶液及反应缓冲液；

(2)分别向1mL比色皿中每次加入0、2、4、6、……、20μL金属离子溶液及20、18、16、14、……、0μL多酚溶液，使得每次加入的金属离子溶液和多酚溶液总体积保持为20μL不变，然后补加反应缓冲液至1mL，充分混合，室温放置1-2min；

(3)每次混合后，用分光光度计测定反应溶液在330nm下的吸光度值，以反应缓冲液为空白；

(4)收集每次测定的吸光度值，利用MatLab软件进行四项式曲线模拟，得到以[M]/[M+PP]([M]＝金属离子的摩尔浓度，[M+PP]＝金属离子和多酚化合物的总摩尔浓度)为横坐标，吸光度值为纵坐标的四项式模拟曲线图，曲线最高点对应的X值，即为络合物的化学计量比。

步骤(1)中所述的反应缓冲液为磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐、醋酸盐、巴比妥酸盐、Tris(三羟甲基氨基甲烷)等缓冲液。

步骤(4)中所述的MatLab软件进行四项式曲线模拟方程为：

其中：k为级数，ɑ为曲线与y轴相交的点的数值，y为混合溶液的吸光度值，x为金属离子浓度占总浓度的摩尔比例，总浓度为金属离子浓度+多酚化合物浓度。

本发明的有益效果：本发明技术操作简单、便捷、对仪器设备要求低、稳定性好，可用于多酚化合物与金属离子的络合反应的化学计量比的测定。

附图说明

图1茶多酚(Cat)分别与Al³⁺在pH6.0条件下的络合反应化学计量比四项式模拟曲线。