[发明专利]DC细胞培养方法、培养基和基于DC治疗策略的药物及酪氨酸激酶抑制剂在制备其的应用

说明书

本发明公开了DC细胞培养方法、培养基和基于DC治疗策略的药物及酪氨酸激酶抑制剂在制备其的应用；其中，DC细胞培养方法在诱导分化未成熟DC细胞的培养过程中，于培养基中加入酪氨酸激酶抑制剂，经诱导分化培养获得成熟DC细胞；培养基为含有酪氨酸激酶抑制剂的细胞培养基，并可用于未成熟DC细胞诱导分化为成熟DC细胞的培养；基于DC治疗策略的药物中含有酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂可用于制备基于DC治疗策略的药物。上述方案能解决目前DC细胞培养方法不能满足于临床疗效所需高度成熟或高活性的DC细胞的问题，达到提高DC细胞成熟度或活性的目的。

技术领域

本发明涉及DC细胞相关技术领域，尤其涉及DC细胞培养方法、培养基和基于DC治疗策略的药物及酪氨酸激酶抑制剂在制备其的应用。

背景技术

DC细胞(树突状细胞)作为最重要的抗原呈递细胞，可以通过引发幼稚T细胞并促进其向Th细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的增殖和分化，在抗肿瘤免疫中发挥重要作用。

在过去的几十年中，基于DC细胞的抗肿瘤治疗策略迅速发展；例如，培养自体树突状细胞以增强其活性、之后再回输患者体内的方式为当前研究及应用的前沿技术，其不仅可有效激发出肿瘤患者体内的抗肿瘤免疫应答、在研究与应用中显示出良好的疗效，而且对于健康人群或免疫力降低人群可以起到提高机体免疫力、防治疾病、预防疾病发生发展的保健作用。

但是，由于血液肿瘤慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患者具有免疫力显著低下的特征，所以免疫活性低下或免疫缺陷的树突状细胞是导致体外培养、活化患者自体树突状细胞效果不理想，以及自体树突状细胞回输患者体内后临床疗效不理想的主要原因。

而现有的DC细胞培养方法中，通过外周血单个核细胞于基础培养基中先经GM-CSF和IL-4诱导产生未成熟DC细胞，再经TNF-α、PGE2和IL-6刺激诱导分化为成熟DC细胞；其虽然可以使得患者自体DC细胞一定程度上具有成熟度或活性，但是其与临床疗效所需的高度成熟或高活性DC细胞仍存在差距。

发明内容

本发明公开一种DC细胞培养方法、培养基和基于DC治疗策略的药物及酪氨酸激酶抑制剂在制备其的应用，以解决目前DC细胞培养方法不能满足于临床疗效所需高度成熟或高活性的DC细胞的问题，达到提高DC细胞成熟度或活性的目的。

为了解决上述问题，本发明采用下述技术方案：

第一方面，本发明提供了一种DC细胞培养方法，其在诱导分化未成熟DC细胞的培养过程中，于培养基中加入酪氨酸激酶抑制剂，经诱导分化培养获得成熟DC细胞。

可选地，所述酪氨酸激酶抑制剂为伊马替尼、达沙替尼和尼洛替尼中的至少一种。

可选地，DC细胞培养方法包括以下步骤：将外周血单个核细胞进行贴壁粘附2小时，之后留下其中贴壁细胞于DCⅠ培养基中培养，所述培养基为添加有血清、GM-CSF和IL-4的基础培养基，经诱导培养产生所述未成熟DC细胞；再于所述DCⅠ培养基中加入诱导分化刺激物和所述酪氨酸激酶抑制剂，经继续培养后获得所述成熟DC细胞。

可选地，所述诱导分化刺激物包括细胞因子TNF-α、IL-6和PGE2。

可选地，所述诱导分化刺激物还包括抗原肽MART-1_aa26-35*A27L。

可选地，所述基础培养基为由RPMI 1640和L-谷氨酰胺组成的基础培养基。

第二方面，本发明提供了一种培养基，所述培养基为含有酪氨酸激酶抑制剂的细胞培养基，并可用于未成熟DC细胞诱导分化为成熟DC细胞的培养。

第三方面，本发明提供了一种基于DC治疗策略的药物，所述基于DC治疗策略的药物中含有酪氨酸激酶抑制剂。